细胞角蛋白19-mRNA定量检测

作者：何丽芸; 王胜利; 徐顺清; 朱慧君; 舒柏华

来源：中国公共卫生, 2008, 24(09): 1086-1087.

DOI：10.3321/j.issn:1001-0580.2008.09.032

• 细胞角蛋白19-mRNA
• 逆转录聚合酶链反应
• 生物发光

目的基于水母发光蛋白生物发光免疫分析技术,建立一种细胞角蛋白19-mRNA(CK19-mRNA)定量检测技术。方法用生物发光分析技术检测淋巴细胞的CK19-mRNA。利用RT-PCR对CK19-mRNA进行放大,PCR引物的5′端用生物素标记,然后用交联了地高辛寡核苷酸探针与目标生物素化的DNA模板杂交。杂交复合物与包被在微孔板上的链亲合素结合,加入标记了水母发光蛋白的地高辛抗体与地高辛特异结合,再加入钙离子激发水母发光蛋白发光,发光强度正比于CK19-mRNA的量。结果该技术的线性范围可达5个数量级,标准曲线的直线回归系数r=0.98~0.99,探测灵敏度可达22 amol/L的CK19-mRNA产物。重复性检测中,批间变异系数<70%,批内变异系数<6%。结论生物发光分析技术是一种灵敏可靠、非放射性的微量CKl9-mRNA定量方法。

• 单位
  公共卫生学院; 华中科技大学同济医学院