全血中谷胱甘肽与N-乙基马来酰亚胺的衍生化反应条件实验

作者：徐莹莹; 王志辉; 王燕一

来源：解放军医学院学报, 2017, 38(07): 619-623.

DOI：10.3969/j.issn.2095-5227.2017.07.007

• 谷胱甘肽
• 衍生化
• 色谱法,高效液相

目的对全血中谷胱甘肽(glutathione,GSH)与N-乙基马来酰亚胺(N-ethylmaleimide,NEM)的衍生化反应条件进行比较,以达到完全衍生化。方法随机选取2016年4月-2016年6月解放军总医院体检中心健康成年人60例(2379岁,男29例,女31例)。分别采集静脉血2 ml,用于衍生化反应条件实验及GSH的正常值测定。应用高效液相色谱与质谱联用技术(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)分组分析温度、pH、反应时间等因素对衍生化过程的影响。A组:分别于室温(25℃)下反应10 min、30 min、60 min;B组:分别于50℃、60℃、70℃、80℃、90℃水浴加热10 min;C组:Tris-Cl缓冲液(pH=8)调节pH,于室温(25℃),70℃、80℃、90℃水浴加热10 min;D组:样本衍生化后,分别于室温(25℃),70℃、80℃、90℃水浴加热10 min,再加入蛋白沉淀试剂。结果 D组衍生化反应较彻底且室温25℃亚组与其他组相比未衍生化GSH相对比率最低(P<0.05)。应用D组方法检测健康成人全血中GSH为(1 471.61±269.43)μmol/L,氧化型谷胱甘肽为(0.84±0.38)μmol/L。结论当衍生化试剂NEM与沉淀蛋白试剂SSA分别加入时,无需另外调节pH以及温度就能达到较彻底的衍生化反应。

• 单位
  长沙市口腔医院; 解放军总医院