717解毒合剂通过NETs-CYR61/CCN1信号通路对蝮蛇咬伤大鼠局部组织损伤修复作用

作者：董德刚; 杨悦; 郑向龙; 毛文丽; 宋梅; 严张仁^*; 王万春^*

来源：中国药学杂志, 2024, 59(02): 151-160.

• 717解毒合剂
• 蝮蛇咬伤
• 中性粒细胞胞外陷阱
• 细胞外基质
• 富含半胱氨酸蛋白61
• 局部组织

目的 探究717解毒合剂对蝮蛇咬伤大鼠局部组织中性粒细胞胞外陷阱(neutrophil extracellular traps, NETs)水平，以及对富含半胱氨酸蛋白61(CYR61/CCN1)表达的影响。方法 将SD大鼠随机分为正常对照组、蝮蛇咬伤组及抗蝮蛇毒血清组及717解毒合剂高、低剂量组。收集血清、大腿腓肠肌，采用苏木素-伊红(Hematoxylin-Eosin staining, HE)和马松(Masson)染色观察各组腓肠肌病理学变化，透射电镜观察腓肠肌超微结构，原位末端凋亡(TUNEL)法检测各组大鼠腓肠肌细胞凋亡情况，PicoGreen荧光检测各组血清游离DNA(cf-DNA)水平，酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)法检测各组血清与腓肠肌中髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的表达水平，免疫组化检测腓肠肌中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase, NE)的改变，免疫荧光法检测各组大鼠腓肠肌瓜氨酸化组蛋白H3(CitH3)水平，Western blot与聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)技术检测腓肠肌组织CYR61/CCN1蛋白及其mRNA表达情况。结果 与正常组比较，模型组出现显著的炎性浸润与出血反应，且胶原纤维化程度均升高；超微结构显示模型组大鼠腓肠肌细胞结构损伤严重，肌节呈非对称性分布，肌原纤维丝断裂；并分布有大量凋亡细胞，血清cf-DNA、MPO含量显著上升(P<0.01),腓肠肌MPO及CitH3蛋白表达均有升高(P<0.05或P<0.01),腓肠肌CYR61/CCN1蛋白及其mRNA表达均有上调；717解毒合剂各给药组均能显著改善大鼠局部炎性反应及出血症状，降低胶原纤维化程度，有效抑制蝮蛇咬伤大鼠腓肠肌细胞凋亡率，减少血清cf-DNA、MPO含量(P<0.05或P<0.01),717解毒合剂高剂量组抑制了腓肠肌NE、MPO的表达，717解毒合剂各给药组均能降低腓肠肌CitH3的表达(P<0.05或P<0.01),抑制了CYR61/CCN1蛋白及其mRNA高表达。结论 蝮蛇毒诱导局部组织中性粒细胞NETs形成，CYR61/CCN1地过表达，717解毒合剂改善了大鼠腓肠肌超微结构，抑制了细胞凋亡，并可能通过调控NETs-CYR61/CCN1信号通路改善蛇伤症状，NETs信号分子及CYR61/CCN1有望成为蝮蛇毒致局部组织损伤防治的新靶点。

• 单位
  江西中医药大学; 江西中医药大学附属医院; 生命科学学院