依托咪酯对脂多糖诱导人气道平滑肌细胞炎性损伤的改善作用及其机制

作者：张芸; 袁风雷; 袁若琳; 李钊

来源：山东医药, 2023, 63(21): 30-34.

• 依托咪酯
• 人气道平滑肌细胞
• 细胞炎性损伤
• 细胞存活
• 细胞凋亡
• 转化生长因子-β1
• Smad家族蛋白3

目的 观察依托咪酯对脂多糖（LPS）诱导人气道平滑肌细胞（ASMCs）炎性损伤的改善作用，并探讨其机制。方法 取对数生长期的人ASMCs分为对照组、LPS组、依托咪酯低浓度组、依托咪酯中浓度组、依托咪酯高浓度组。对照组常规培养ASMCs;LPS组加入500 ng/mL的LPS；依托咪酯低浓度组、依托咪酯中浓度组、依托咪酯高浓度组加入500 ng/mL的LPS后，再分别加入5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL的依托咪酯。各组细胞继续培养72 h，采用ELISA法检测细胞中炎性因子IL-2、IL-6、TNF-α，采用MTT法测算细胞存活率，采用流式细胞法检测细胞凋亡率，采用荧光定量PCR法检测细胞中转化生长因子（TGF）-β1、Smad家族蛋白3(Smad3)mRNA，采用蛋白印迹法检测细胞中TGF-β1、Smad3蛋白。结果 与对照组相比，LPS组、依托咪酯低浓度组、依托咪酯中浓度组、依托咪酯高浓度组细胞中IL-2、IL-6、TNF-α水平均升高（P均<0.05）；与LPS组相比，依托咪酯低浓度组、依托咪酯中浓度组、依托咪酯高浓度组细胞中IL-2、IL-6、TNF-α水平均降低（P均<0.05），且依托咪酯中浓度组、依托咪酯高浓度组低于依托咪酯低浓度组（P均<0.05），依托咪酯高浓度组低于依托咪酯中浓度组（P<0.05）。对照组、LPS组、依托咪酯低浓度组、依托咪酯中浓度组、依托咪酯高浓度组细胞存活率分别为100.00%、40.08%±6.04%、52.87%±6.21%、66.48%±7.10%、81.26%±9.54%，组间相比，P均<0.05。对照组、LPS组、依托咪酯低浓度组、依托咪酯中浓度组、依托咪酯高浓度组细胞凋亡率分别为4.40%±1.09%、25.16%±5.07%、19.77%±4.03%、14.71%±2.25%、10.05%±2.05%，组间相比，P均<0.05。与对照组相比，LPS组、依托咪酯低浓度组、依托咪酯中浓度组、依托咪酯高浓度组细胞中TGF-β1 mRNA和蛋白相对表达量、Smad3 mRNA和蛋白相对表达量均升高（P均<0.05）；与LPS组相比，依托咪酯低浓度组、依托咪酯中浓度组、依托咪酯高浓度组细胞中TGF-β1 mRNA和蛋白相对表达量、Smad3 mRNA和蛋白相对表达量均降低（P均<0.05），且依托咪酯中浓度组、依托咪酯高浓度组低于依托咪酯低浓度组（P均<0.05），依托咪酯高浓度组低于依托咪酯中浓度组（P<0.05）。结论 5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL的依托咪酯对LPS诱导人ASMCs炎性损伤均具有改善作用，可升高细胞存活率、降低细胞凋亡率，且20μg/mL依托咪酯的的改善作用最强。依托咪酯对LPS诱导人ASMCs炎性损伤的改善作用机制可能与抑制TGF-β1/Smad3信号通路的激活有关。