沙眼衣原体T3SS效应蛋白CT622的表达与多克隆抗体制备以及对HeLa细胞增殖的影响

作者：彭彬峰; 陈诗诗; 舒明艺; 陈恩; 雷文波^*; 刘双全^*

来源：中国病原生物学杂志, 2022, 17(01): 81-86.

DOI：10.13350/j.cjpb.220117

• 沙眼衣原体
• CT622
• 原核表达
• 多克隆抗体
• 细胞增殖

目的 原核表达沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)CT622蛋白，制备CT622多克隆抗体，初步探讨CT622蛋白对HeLa细胞增殖的影响，为进一步阐明CT622蛋白在沙眼衣原体致病中的作用提供实验依据。方法 以Ct D型基因组为模板构建原核表达重组载体pGEX-6p-1/CT622;重组载体经IPTG诱导表达，Glutathione Sepharose 4B beads纯化GST-CT622融合蛋白，PreScission Protease酶切除GST标签后获取纯化的CT622蛋白；将纯化的CT622蛋白去内毒素处理后，经皮下免疫新西兰兔获取抗CT622抗体，采用抗原亲和纯化层析柱进行抗体纯化，BCA测定抗体浓度，SDS-PAGE鉴定多克隆抗体纯度，ELISA检测抗体效价；用不同浓度的CT622蛋白处理HeLa细胞24 h, CCK-8细胞活性检测试剂盒检测细胞存活率(%)。结果 成功表达并纯化了CT622蛋白，该蛋白最佳表达条件为IPTG终浓度0.8 mol/L,30℃、180 r/min条件下诱导4 h。制备兔源性抗CT622多克隆抗体，纯化后抗CT622抗体浓度为0.75 mg/ml,纯度>70%,ELISA检测免疫兔血清抗体效价为1∶512 000左右；经1～15μg/ml浓度梯度的CT622蛋白处理HeLa细胞后，其细胞存活率高于对照组。结论 成功表达、纯化了沙眼衣原体CT622蛋白，制备了高效价兔源性抗CT622抗体。在一定浓度范围内，CT622蛋白能促进HeLa细胞的增殖。

• 单位
  衡阳市中医医院; 南华大学