脑胶质瘤CD47表达水平及对细胞增殖和迁移影响

作者：刘学键; 刘永; 杨清华; 武霞^*

来源：中华肿瘤防治杂志, 2020, 27(15): 1195-1202.

DOI：10.16073/j.cnki.cjcpt.2020.15.03

• 胶质瘤
• CD47
• 细胞凋亡
• 增殖
• 迁移

目的脑胶质瘤是最常见的颅内肿瘤,因具有较高的增殖和迁移能力使其胶质瘤复发率、死亡率高等特点。本研究旨在探讨脑胶质细胞瘤CD47表达水平及对细胞凋亡、增殖和迁移的影响,为胶质瘤提供重要预测指标和治疗靶点。方法人胶质瘤U87培养并转染HBLV-CD47shRNAs和HBLV-CD47;实验分为U87细胞群、HBLV-GFP组、HBLV-CD47shRNA1、HBLV-CD47shRNA2、HBLV-CD47shRNA3 5组;采用细胞迁移实验评估U87细胞迁移;采用CCK-8法检测U87增殖。建立裸鼠皮下人脑胶质瘤移植瘤模型,实验分为U87细胞群、HBLV-GFP组、HBLV-CD47shRNA3组和HBLV-CD47组4组,肿瘤细胞接种后4周处死裸鼠,剥离瘤块并称质量。采用TUNEL法检测细胞凋亡;采用逆转录聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测CD47的表达;采用HE染色和免疫组织化学法观察肿瘤形态,评估Ki-67的表达。结果免疫荧光分析结果显示,U87细胞群、HBLV-GFP组、HBLV-CD47shRNA1、HBLV-CD47shRNA2、HBLV-CD47shRNA3组CD47抑制率分别为(23.87±1.32)%、(5.64±1.45)%、(80.36±1.13)%、(73.47±1.21)%和(87.68±1.62)%,与HBLV-GFP比较,3组HBLV-CD47shRNAs组对CD47表达有抑制作用。qRT-PCR检测结果表明,与HBLV-GFP组相比,HBLV-CD47shRNA3组CD47基因表达显著降低,HBLV-CD47组升高,F=6.341,P<0.001;同时蛋白质印迹法分析结果也表明,与HBLV-GFP组相比,HBLV-CD47shRNA3抑制CD47蛋白表达,HBLV-CD47增强CD47表达,F=10.206,P<0.001。Transwell细胞迁移实验结果表明,与HBLV-GFP组比较,HBLV-CD47shRNA3组迁移细胞数明显减少,HBLV-CD47组明显增加,F=9.851,P<0.001。CCK-8检测结果表明,与HBLV-GFP组相比,HBLV-CD47shRNA3的U87细胞存活率显著降低,HBLV-CD47的存活率显著提高,F=0.242,P<0.001。裸鼠皮下人脑胶质瘤移植瘤模型结果提示,与注射HBLV-GFP的肿瘤异种移植小鼠相比,注射HBLV-CD47shRNA3显著降低了肿瘤质量,注射HBLV-CD47增加了肿瘤质量,F=10.235,P<0.001。TUNEL染色结果显示,与HBLV-GFP相比,HBLV-CD47shRNA3组显著增加TUNEL阳性染色细胞,HBLV-CD47组TUNEL阳性染色细胞减少,F=9.134,P<0.001;HE染色和免疫组织化学分析结果显示,与HBLV-GFP组相比,HBLV-CD47shRNA3组Ki-67阳性细胞减少,HBLV-CD47组Ki-67阳性细胞显著增加,F=10.132,P<0.001。结论 CD47表达水平可以调节胶质瘤细胞的凋亡、增殖和迁移。CD47的沉默减少了胶质瘤细胞的凋亡、增殖和迁移,并通过诱导细胞凋亡抑制肿瘤生长。Ki-67分子作为肿瘤增殖相关的核抗原,成为判断肿瘤细胞重要的指标。