龙鳖胶囊含药血清通过调控Hippo-YAP信号通路促进骨髓间充质干细胞迁移研究

作者：梁桂洪; 黄和涛; 曾令烽; 杨园; 赵金龙; 潘建科; 杨伟毅; 陈红云; 罗明辉; 韩燕鸿; 刘军

来源：中草药, 2021, 52(15): 4569-4576.

DOI：10.7501/j.issn.0253-2670.2021.15.015

• 龙鳖胶囊
• 含药血清
• 骨髓间充质干细胞
• Hippo-YAP信号通路
• 细胞迁移

目的探索龙鳖胶囊含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)迁移和Hippo-Yes相关蛋白(Yes-associatedprotein,YAP)信号通路的影响。方法通过全骨髓贴壁法提取大鼠原代BMSCs,取第3代细胞,采用流式细胞术检测CD29、CD44、CD45和CD90的表达情况;利用成脂和成骨分化诱导剂对BMSCs进行诱导,成骨分化后采用茜素红染色观察形成矿化结节的情况,成脂分化后采用油红O染色观察脂滴的形成情况。SD大鼠ig龙鳖胶囊(0.625g/kg),2次/d,连续7d,腹主动脉取血,制备含药血清;使用YAP抑制剂Verteporfin(2、5μmol/L)或5.0%含药血清处理BMSCs,采用划痕实验和Transwell迁移实验检测24 h后细胞的迁移情况。给予2.5%、5.0%含药血清处理BMSCs 24 h,采用Western blotting法检测Hippo-YAP信号通路相关蛋白的表达情况。结果 BMSCs分离培养后正常贴壁生长,呈长梭形;经成骨诱导茜素红染色后,可见大量被染成红色的矿化结节;经成脂诱导油红O染色后,可见大量被染成橘红色的脂滴;流式结果显示,表达CD29的阳性率为99.68%,表达CD44的阳性率为99.03%,表达CD45的阳性率为0.14%,CD90的阳性率为95.38%,符合BMSCs的特征。与对照组比较,Verteporfin显著抑制BMSCs迁移(P<0.05、0.01、0.001),5.0%含药血清显著促进BMSCs迁移(P<0.05);与等剂量的Verteporfin组比较,5.0%含药血清+Verteporfin组BMSCs迁移率明显上升(P<0.01、0.001)。2.5%、5.0%含药血清均显著下调大型肿瘤抑制因子2(large tumor suppressor homolog 2,LATS2)蛋白表达水平(P<0.05),上调YAP及其下游蛋白结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)蛋白表达水平(P<0.01)。结论龙鳖胶囊含药血清具有促进BMSCs迁移的作用,其作用机制可能与调控Hippo-YAP信号通路相关。

• 单位
  广东省中医院; 广东省中医药科学院; 广州中医药大学第二附属医院