重组腺病毒转导的MSC导向的CNTF基因靶向性治疗MS对髓鞘和轴突的保护作用

作者：陆正齐; 胡学强; 朱灿胜; 王敦敬; 郑雪平

来源：中国免疫学杂志, 2008, (09): 810-817.

• 睫状神经生长因子
• 重组腺病毒载体
• 多发性硬化
• 实验性变态反应性脑脊髓炎
• 骨髓间充质细胞

目的:探讨重组腺病毒转导的骨髓间充质细胞导向(MSC)的睫状神经营养因子(CNTF)基因靶向性治疗多发性硬化对髓鞘和轴突的保护机制。方法:先构建、扩增、纯化Ad-CNTF-IRES-GFP,在体外培养MSC细胞。将1×108Ad-CNTF-IRES-GFP转染MSCS1×106,测定上清液中CNTF的浓度。再用MOG35-55建立C57BL/6小鼠EAE模型,将Ad-CNTF-IRES-GFP转染的MSC移植治疗EAE小鼠,观察其病情评分;免疫荧光观察其病变部位的外源性MSCs数量;免疫组化观察少突胶质细胞前体细胞(OPC)-NG2(+)细胞在病变部位的数量,Westernblot和免疫组化法观察神经生长因子CNTF表达,免疫组化观察促凋亡蛋白Caspase-3表达;病理观察髓鞘、轴突损伤情况;电镜观察髓鞘和轴突以及ODC损伤情况;所有的数据用x—±s表示。采用SPSS13.0进行统计分析。结果用多因素方差分析,P<0.05差异有显著性。结果:MSC-Ad-CNTF-IRES-GFP治疗的EAE小鼠病情显著减轻。不仅平均发病时间缩短,发病率下降,病情减轻,而且病情严重程度也明显减轻。外源性MSC出现在EAE的脊髓病变部位。治疗后的EAE小鼠脊髓病变部位的NG2(+)表达明显增加,促凋亡蛋白Caspase-3的表达明显降低。治疗后的EAE小鼠病变部位的髓鞘和轴突变性明显减轻。结论:MSC-Ad-CNTF-IRES-GFP可有效治疗EAE动物。其机制可能是:Ad-CNTF-IRES-GFP转染的MSC细胞定向去病变部位,升高其部位CNTF水平和NG2(+)细胞数量,减轻其部位髓鞘、轴突及ODC损伤,减少促凋亡蛋白Caspase-3表达。

• 单位
  中山大学附属第三医院