应用抑制性消减杂交技术克隆和筛选HCVp7蛋白的反式调节基因

作者：郭江成军纪冬赵龙凤王建军刘妍黄燕萍

来源：世界华人消化杂志, 2004, (11): 76-79.

• 反式调节基因
• HCVp7
• 反式激活
• 转染
• 丙型肝炎病毒
• 表达质粒
• 插入片段
• 蛋白编码基因
• 生物信息学分析
• 全长序列

目的:构建丙型肝炎病毒HCV p7蛋白反式激活相关基因差异表达的差异cDNA,克隆HCV p7蛋白反式激活相关基因. 方法:以HCV p7表达质粒pcDNA3.1(-)-p7转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,从中提取mRNA并合成cDNA,经Rsa Ⅰ酶切后将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR后进行测序及同源性分析. 结果:成功构建人HCV p7蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA.扩...

• 单位
  解放军第302医院; 山西医科大学