猪圆环病毒3型Cap蛋白单克隆抗体的制备及其在免疫组化试验中的初步应用

作者：赵冬; 王小波; 高清清; 郇长超; 王万彬; 高崧^*; 刘秀梵

来源：中国预防兽医学报, 2019, 41(02): 174-178.

• 猪圆环病毒3型
• Cap蛋白
• 单克隆抗体
• 免疫组化

为制备猪圆环病毒3型(PCV3)Cap蛋白单克隆抗体(MAb),并初步应用于感染细胞或组织样品中PCV3抗原的间接免疫荧光试验(IFA)或免疫组化(IHC)检测,本研究将PCV3 Cap蛋白的去核定位信号肽基因克隆于原核表达载体pET-28a中,经IPTG诱导表达了具有免疫原性的融合蛋白。以表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,共获得8株能够稳定分泌针对PCV3 Cap蛋白的MAb杂交瘤细胞株。Western blot与IFA试验结果显示,8株MAbs均能够与真核表达的重组Cap蛋白反应。选取3株杂交瘤细胞制备3株MAbs,小鼠腹水效价分别为1∶409 600、1∶204 800和1∶409 600。利用3株MAbs对自然感染PCV3临床病猪的腹股沟淋巴结进行IHC检测,结果显示3株MAbs的腹水均能够与感染PCV3的临床样品发生特异性的免疫反应。本研究制备的MAbs具有较好的特异性,为深入研究Cap蛋白的结构和PCV3快速诊断奠定了基础。

• 单位
  江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心; 扬州大学; 农业部