补阳还五汤对肺纤维化小鼠中介导细胞自噬的mTOR蛋白的调控机制探讨

作者：潘怡; 王振兴; 郭静; 张川峰; 王丽娟; 杨晗^*; 王飞^*

来源：中国实验方剂学杂志, 2019, 25(06): 23-31.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20190602

• 补阳还五汤
• 肺纤维化
• 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)
• 自噬
• 电镜

目的:观察肺纤维化中介导自噬的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的表达、自噬在肺纤维化形成中的作用,探索补阳还五汤对肺纤维化的治疗机制。方法:144只C57BL/6小鼠随机分为6组,分别为假手术组,模型组,强的松组,补阳还五汤高、中、低剂量组,每组24只,假手术组小鼠给予气管注入等量的0. 9%生理盐水,其余各组采用博莱霉素(bleomycin,BLM)气管注入法复制肺纤维化模型,造模后假手术组、模型组给予0. 9%生理盐水(0. 01 g·kg-1·d-1),补阳还五汤高剂量组给予补阳还五汤(28. 08 g·kg-1·d-1),补阳还五汤中剂量组给予补阳还五汤(14. 04 g·kg-1·d-1),补阳还五汤低剂量组给予补阳还五汤(7. 02 g·kg-1·d-1),强的松组给予强的松(0. 455 g·kg-1·d-1)灌胃,于造模后第7,14,28天分批提取样本。采用苏木素-伊红(HE)及马松(Masson)染色观察小鼠肺泡炎和纤维化程度;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肺组织mTOR,核糖体S6,微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(microtubule-associate protein 1 light chain 3,MAP1LC3-Ⅱ)的表达;电镜检测观察小鼠肺组织自噬情况。结果:与假手术组比较,模型组小鼠在7,14,28 d肺泡炎及肺纤维化显著(P <0. 01);与模型组比较,给药组各时间点肺泡炎和肺纤维化程度均有不同程度的改善(P <0. 05),补阳还五汤高剂量组下降最明显(P <0. 05)。与假手术组比较,模型组小鼠肺组织mTOR,S6蛋白表达水平显著上调(P <0. 01),与模型组比较,各给药组mTOR,S6蛋白表达下调(P <0. 01);与假手术组比较,模型组小鼠肺组织LC3-Ⅱ表达水平下调(P <0. 01),与模型组比较,各给药组LC3-Ⅱ上调(P <0. 01)。假手术组细胞形态良好,未见自噬。模型组细胞形态最差,存在个别自噬。各给药组细胞形态及自噬数量好于模型组,其中补阳还五汤高、中剂量组自噬数量最多。结论:在BLM所致小鼠肺纤维化形成的过程中,小鼠肺组织中mTOR蛋白被激活,自噬抑制,mTOR蛋白通过抑制自噬参与了肺纤维化的发病;补阳还五汤对BLM所致小鼠肺纤维化有一定的治疗作用,其机制可能与其下调介导细胞自噬的mTOR蛋白表达有关。

• 单位
  成都中医药大学