生物反应器高密度无血清培养全悬浮MDCK细胞和流感病毒工艺的建立

作者：李乐凯; 吴业红; 徐军; 迟祥; 李爽; 席莉; 张雪梅^*; 郭占龙^*

来源：中国生物制品学杂志, 2022, 35(09): 1082-1089.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003710

• 流感病毒
• MDCK细胞
• 无血清培养
• 全悬浮培养

目的 优化生物反应器高密度无血清培养全悬浮MDCK细胞和流感病毒的条件，并放大培养规模，建立MDCK细胞和4种型别流感病毒的培养工艺。方法 分别在不同溶氧（DO）、pH、转速、接种密度条件下培养MDCK细胞，每24 h取样计数，优化细胞培养条件后，放大至50 L生物反应器，并接种4种型别流感病毒（H1N1:A/California/7/2009、H3N2:A/Texas/20/2012、BV:B/Brisbane/60/2008、BY:B/Phuket/3073/2013），接毒条件为MOI=10-4，胰酶终浓度为15μg/mL，细胞密度为（1.8～2.2）×106个/mL，病毒维持液为DMEM，培养温度为甲型34.5℃、乙型33.5℃，检测病毒血凝效价、病毒滴度（CCID50）和血凝素（hemagglutinin,HA）含量。结果 在5 L及50 L生物反应器中培养MDCK细胞，活细胞密度均可在72 h后达到8.0×106个/mL，活率在95%以上；H1N1、H3N2、BV、BY的血凝效价分别为7、11、9、9 log2(HAU/25μL),CCID50均达6.5以上，HA含量分别为20、40、35、40μg/mL。结论 成功建立了MDCK细胞和流感病毒的无血清全悬浮培养工艺，为细胞基质流感疫苗的研发奠定了基础。

• 单位
  长春生物制品研究所