A549细胞来源外泌体对肺上皮BEAS-2B细胞紧密连接蛋白及骨架重塑的影响

作者：邓仕华; 吴东明; 韩蓉; 刘腾; 张婷; 谢洪祥; 许颖

来源：医学研究生学报, 2017, 30(10): 1035-1040.

DOI：10.16571/j.cnki.1008-8199.2017.10.005

• A549
• Exosome
• BEAS-2B
• 紧密连接蛋白
• 骨架重塑
• 侵袭

目的外泌体与肿瘤细胞的发生发展密切相关,但具体机制不详。文中旨在探讨非小细胞肺癌A549细胞来源外泌体对正常肺上皮BEAS-2B细胞紧密连接蛋白及骨架重塑的影响。方法超速离心法提取A549细胞exosome,透射电镜进行形态学观察,Western blot鉴定表面标志物CD9、CD63。实验分实验组和对照组,实验组为BEAS-2B细胞中加入终浓度为50μg/m L的exosome,对照组为BEAS-2B细胞中加入等量的PBS液,通过免疫荧光实验、Western blot实验、q PCR实验检测exosome对BEAS-2B细胞紧密连接蛋白ZO-1和Occludin蛋白及mRNA表达的影响,phalloidin-FITC荧光染色实验检测exosome对BEAS-2B细胞骨架重塑的影响,Transwell侵袭实验检测exosome处理BEAS-2B后对A549细胞侵袭BEAS-2B细胞能力的影响。结果免疫荧光实验表明,与对照组相比,实验组的ZO-1及Occuldin的表达明显减少;Western blot实验也表明exosome处理BEAS-2B后可显著减少ZO-1和Occuldin蛋白的表达(P<0.05)。q PCR实验表明,与对照组相比,外泌体处理BEAS-2B后可明显下调紧密连接蛋白ZO-1(1.00±0.00 vs 0.45±0.04)和Occuldin mRNA(1.00±0.00 vs 0.52±0.08)水平,差异有统计学意义(P<0.01)。phalloidin-FITC检测结果表明,与对照组相比exosome直接处理后BEAS-2B细胞后F-actin重聚明显增多。Exosome处理BEAS-2B后A549穿过微孔膜的细胞数量[(22.0±4.0)个]明显高于对照组[(10.6±4.5)个],差异有统计学意义(P<0.05)。结论 A549细胞来源exosome可通过下调BEAS-2B细胞紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达,促进BEAS-2B细胞骨架重塑,最终破坏BEAS-2B细胞对肿瘤细胞A549的屏障作用。

• 单位
  成都医学院第一附属医院