实验动物常见支原体荧光定量PCR检测方法建立

作者：辛闻婷; 杨媛媛; 王馨宇; 吴东; 李灵恩^*

来源：实验动物科学, 2019, 36(05): 60-65.

• 支原体
• 实验动物
• 荧光定量PCR

目的建立能对实验动物常见支原体进行检测的荧光定量PCR方法。方法针对多种大、小鼠易感支原体的16 s rRNA基因中较保守的区域设计1对引物和探针,建立荧光定量PCR方法并检测其特异性、灵敏性及重复性。结果该方法在模板浓度为5×100～5×106copies/μL之间呈良好的线性关系(R2=0. 9972)且扩增效率为98. 11%;特异性强,能够区分检测金黄色葡萄球菌等常见的病原菌;灵敏性高,检测下限为5 copies/μL,比常规PCR的检测灵敏性高100倍;重复性好,对不同浓度模板进行组内和组间重复性试验的变异系数均低于2%。用荧光定量PCR和普通PCR方法对不同来源不同类型的120份临床样品进行检测,结果表明小鼠支原体检测阳性率分别为3. 33%(2/60)、1. 67%(1/60),细胞样品支原体检测阳性率均为5%(3/60)。结论本研究建立的荧光定量PCR方法快速、特异强、灵敏性高、重复性好,可用于实验动物常见支原体的快速诊断。