单核细胞增生李斯特菌的单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立

作者：张海洋; 刘爽; 戚雪芹; 王权; 陈兆国; 韩先干^*; 蒋蔚^*

来源：中国兽医科学, 2021, 51(08): 962-969.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0131

• 单核细胞增生李斯特菌
• 单克隆抗体
• 多克隆抗体
• 双抗体夹心ELISA

为建立奶制品中单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)的快速检测方法,分别制备抗LM的单克隆抗体和家兔多克隆抗体,以方阵滴定法确定最佳单抗包被浓度和多抗工作浓度,从而建立LM的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法。结果表明,抗LM的单抗和多抗效价分别为1∶128 000和1∶2 560 000,分别以抗LM单抗和多抗作为捕获抗体与检测抗体;经优化后选择抗LM单克隆抗体稀释至1∶1 000、抗LM兔多抗稀释至1∶4 000建立ELISA检测方法。结果显示:所建立的双抗体夹心ELISA方法对LM的最低检测限可达到1×105CFU/m L,与常见的10种食源性病原微生物均无交叉反应,表明该方法的特异性良好。重复性试验结果显示,该方法的批内、批间变异系数均小于10%,表明该方法具有良好的重复性。模拟样品试验结果表明,在牛奶样本中添加LM至细菌浓度为1×100CFU/m L时,增菌培养10 h后用本方法即可检出阳性;牛奶样本的添加回收试验进一步表明回收率可达70.22%～91.59%,提示本方法可有效用于牛奶样本中LM的检测。综上,利用抗LM的单抗和兔多抗成功建立了双抗体夹心ELISA方法,该方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可为牛奶中LM的监测提供技术支撑。

• 单位
  南京农业大学; 中国农业科学院上海兽医研究所