RNA干扰沉默酸性鞘磷脂酶1基因对人成纤维细胞凋亡的影响

作者：高军; 马芸; 张仁礼; 刘彩霞; 周灿权

来源：生殖医学杂志, 2009, 18(01): 38-43.

• RNA干扰
• 小分子干扰RNA
• 凋亡
• 卵巢衰竭

目的为研发保护女性生殖细胞的小分子干扰RNA(siRNA)类药物,以人包皮成纤维细胞(HFF)为模型,检测靶向凋亡关键基因酸性鞘磷脂酶1(SMPD1)基因的siRNA对HFF凋亡的抑制作用。方法设计合成三对靶向SMPD1基因的siRNA并体外转染HFF细胞,转染后48 h用丝裂霉素(MMC)诱导细胞凋亡。荧光定量逆转录-聚合酶链反应(Q-RT-PCR)法及免疫印迹(Western blot)检测siRNA转染后SMPD1在mRNA水平和蛋白水平的变化,Annexin Ⅴ -PI双染检测细胞凋亡率。用脂质体(lipofectamine 2000)和无干扰siRNA(NT siRNA)作为对照。结果 siRNA1、 2 、 3对SMPD1基因mRNA的抑制效率分别为(67. 0±9.0)%、0%、(45.0±2.1)%,以siRNA1最高,蛋白水平的抑制也呈现相同变化。siRNA1组细胞凋亡率为15.2%,明显低于 MMC组(26. 3%)。结论靶向SMPD1的siRNA可以抑制人包皮成纤维细胞凋亡。

• 单位
  中山大学; 中山大学附属第一医院; 广东省人民医院