问号钩端螺旋体MazF蛋白对巨噬细胞的毒性作用分析

作者：张金良; Komi-KoukouraKomi; 楼宏强; 林旭瑷; 严杰; 孙爱华

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2013, (8): 561-567.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2013.08.001

• 问号钩端螺旋体
• MazEF操纵子
• 毒素-抗毒素系统
• 细胞毒性

　　目的了解问号钩端螺旋体（简称钩体） MazEF毒素-抗毒素系统中MazF蛋白对巨噬细胞的细胞毒性及其机制。方法采用原核表达系统表达问号钩体赖型赖株MazEF毒素-抗毒素系统中的MazE和MazF蛋白（ rMazE和rMazF ）。采用DNA和RNA降解试验确定rMazF的DNA或RNA酶活性以及rMazE抑制rMazF酶活性的作用。采用实时荧光定量RT-PCT、Western blot 和激光共聚焦显微镜法，分别检测问号钩体赖株感染THP-1单核细胞时mazE和mazF基因转录、表达及分泌情况。采用CCK-8法和流式细胞术检测mazF基因产物对THP-1细胞的细胞毒性及死亡方式。结果 rMazF能水解问号钩体赖株和 THP-1细胞的RNA，但无DNA酶活性， rMazE 能抑制rMazF的RNA酶活性。感染THP-1细胞后，mazE-mRNA和mazF-mRNA及MazE和MazF蛋白表达水平显著升高，但仅有MazF蛋白外分泌。 mazF 基因产物对 THP-1细胞有细胞毒性并引起细胞坏死。结论MazEF毒素-抗毒素系统中具有RNA酶活性的MazF蛋白是问号钩体的毒力因子，可引起感染的巨噬细胞坏死。

• 单位
  浙江大学; 杭州医学院; 金华职业技术学院