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摘要
目的 原核表达新型冠状病毒Nsp16重组蛋白并制备兔抗Nsp16多克隆抗体。方法 通过琼脂糖凝胶电泳对含有Nsp16基因的重组质粒进行双酶切鉴定，并将鉴定后的重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞；通过IPTG诱导重组蛋白的表达，利用镍柱亲和层析法纯化该重组蛋白并进行Western blot鉴定；将鉴定后的目的蛋白与弗氏佐剂以1:1的体积比混匀，乳化后免疫新西兰大白兔，利用ELISA和Western blot分别进行多克隆抗体效价的测定及其特异性鉴定。结果 Nsp16基因重组质粒经双酶切后得到912bp的目的片段，重组质粒转化大肠埃希菌表达出分子质量单位为33.3ku的重组蛋白，且主要存在于上清中。用纯化的重组蛋白免疫大白兔，获得兔抗Nsp16特异性多克隆抗体，且其效价达1:409 600以上。结论 重组Nsp16蛋白可以在大肠埃希菌中正确表达，免疫大白兔后获得高效价抗Nsp16多克隆抗体，即具有免疫反应性。为SARS-CoV-2Nsp16蛋白在新型冠状病毒肺炎中的进一步研究奠定了基础。
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单位潍坊医学院; 基础医学院
