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摘要
提取南京地区经鉴定确诊为犬吉氏巴贝斯虫感染病犬血液中的DNA,设计引物采用PCR方法扩增犬吉氏巴贝斯虫HSP70基因,克隆至pET-32a质粒中,转化Rosetta-gami(DE3)pLyS大肠杆菌,利用IPTG诱导表达得到重组热休克蛋白(heat shock protein 70,HSP70)。用Ni柱纯化重组HSP70蛋白免疫BALB/c小鼠制备抗血清,并分析重组蛋白的免疫原性及反应原性。本研究成功构建了pET-32a-hsp70重组质粒,IPTG诱导后表达出可溶的重组HSP70蛋白。经过Western blot分析,表达的重组蛋白不但能够免疫小鼠产生抗体,还可以和天然犬吉氏巴贝斯虫抗血清发生特异性反应,为进一步建立犬巴贝斯虫免疫血清学诊断和疫苗抗原的开发奠定基础。
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