机械牵伸对体外大鼠肌腱干细胞RhoA/Rho相关蛋白激酶分子表达的影响

作者：马林; 唐康来; 周兵华; 杨广华; 陈万; 穆米多; 袁成松

来源：中国修复重建外科杂志, 2014, 28(05): 639-643.

• 肌腱干细胞
• 肌腱病
• RhoA
• Rho相关蛋白激酶
• 大鼠

目的探讨不同机械牵伸条件对大鼠肌腱干细胞(tendon stem cells,TSCs)RhoA/Rho相关蛋白激酶(Rho associated protein kinases,ROCK)分子表达的影响。方法取23月龄雄性SD大鼠(体重200250 g)跟腱组织,采用酶消化法分离培养TSCs。取第23代细胞接种于微沟槽培养皿中,分别以牵伸应变量4%、8%(4%牵伸组、8%牵伸组),牵伸频率1 Hz,牵伸时间4 h/d进行机械牵伸,倒置相差显微镜下观察细胞生长情况;牵伸1、2、3 d后收集细胞,采用实时定量PCR、Western blot检测RhoA、ROCK基因及蛋白表达情况,应用细胞计数试剂盒8检测牵伸后细胞增殖情况。以未牵伸的TSCs作为对照组。结果第2代TSCs形态呈鹅卵石样,聚集生长;接种于微沟槽培养皿后呈杂乱生长;牵伸后细胞贴壁良好,无脱落,并沿受力方向排列。各时间点TSCs中RhoA、ROCK基因相对表达量随牵伸应变量的增加呈递增趋势,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。牵伸1 d时,4%、8%牵伸组与对照组相比RhoA、ROCK蛋白表达水平相似(P>0.05);2、3 d时,4%、8%牵伸组表达水平显著高于对照组,且随牵伸应变量增加呈递增趋势,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);各时间点,8%牵伸组细胞增殖显著低于4%牵伸组及对照组(P<0.05);4%牵伸组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论大鼠TSCs中RhoA、ROCK分子表达水平随牵伸应变量的增加而增加,RhoA/ROCK分子可能是TSCs机械牵伸后的重要效应分子。

• 单位
  第三军医大学西南医院