弓形虫Ⅱ型ROP16蛋白对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383炎性反应的影响

作者：党甜甜; 贾伟; 陈梅; 潘亚菲; 杨宁爱; 康宇婷; 苏雅静; 汪澎涛; 赵志军^*

来源：宁夏医科大学学报, 2022, 44(04): 360-366.

DOI：10.16050/j.cnki.issn1674-6309.2022.04.007

• Ⅱ型ROP16蛋白
• NR8383细胞
• 巨噬细胞极化

目的 探讨弓形虫Ⅱ型ROP16蛋白对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383炎性反应的影响。方法 实验设置空白对照组（正常NR8383细胞）、空载组（pHBLV-CMV）和ROP16过表达组（pHBLV-CMV ROP16），构建ROP16过表达慢病毒载体并转染至NR8383细胞中，经筛选得到稳转细胞系，利用RT-PCR和Western blot法验证慢病毒在ROP16过表达组是否转染成功；免疫荧光法确定ROP16蛋白在NR8383细胞中的定位；Western blot法检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、精氨酸酶1(Arg-1)、核转录因子κB(NF-κB)、磷酸化核转录因子κB(P-NF-κB)、信号转导与转录激活因子1(STAT1)及磷酸化转录活化蛋白1(P-STAT1)蛋白的表达情况；RT-PCR检测iNOS、Arg-1及炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6、TGF-β、IL-10 mRNA水平的表达情况；ELISA检测培养上清中炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6、TGF-β、IL-10的含量。结果 ROP16过表达慢病毒成功稳转NR8383细胞，镜下可观察到明显绿色荧光；免疫荧光结果显示，ROP16蛋白定位于NR8383细胞核中；Western blot结果显示，ROP16过表达组中M1型巨噬细胞表面标志蛋白iNOS的表达高于空白对照组，其通路蛋白NF-κB、P-NF-κB、STAT1、P-STAT1的表达均高于空白对照组（P均<0.05），而M2型巨噬细胞表面标志蛋白Arg-1表达低于空白对照组（P<0.05）;RT-PCR结果显示，ROP16过表达组iNOS及促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA均升高（P均<0.01），而Arg-1及抗炎因子TGF-β、IL-10 mRNA均下降（P均<0.05）;ELISA结果显示，过表达组中促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-12含量均高于空白对照组（P均<0.05），而抗炎因子TGF-β和IL-10的表达均低于空白对照组（P均<0.05）。结论 弓形虫Ⅱ型ROP16定位于NR8383巨噬细胞核中并稳定表达，同时向M1型巨噬细胞方向极化，引发促炎反应。

• 单位
  宁夏医科大学; 宁夏医科大学总医院