H5亚型禽流感病毒HA蛋白在杆状病毒-昆虫细胞系统中的表达与纯化

作者：刘郁夫; 陈晓洁; 区炳明; 容芳; 郝文茜; 陈瑞爱^*

来源：动物医学进展, 2023, 44(10): 19-24.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2023.10.008

• H5亚型禽流感病毒
• HA蛋白
• 杆状病毒
• 蛋白表达

为表达H5亚型禽流感病毒HA蛋白研制亚单位疫苗，构建了pFastBAC-HA重组质粒，转化至DH10Bac感受态细胞，获得重组HA基因的杆状病毒质粒，再将重组杆状病毒质粒转染至Sf9细胞，拯救重组病毒，通过间接免疫荧光和Western blot试验对Sf9细胞中表达的HA蛋白进行鉴定。结果表明表达的重组HA蛋白均能与抗Strep标签抗体、H5亚型禽流感病毒阳性血清(Re-11株)特异性结合，且HA重组蛋白在昆虫细胞中以细胞分泌上清的形式表达，红细胞凝集效价为1∶64,利用链霉素亲和层析的方法，纯化重组HA蛋白，纯化后HA蛋白浓度为0.364 mg/mL。试验结果可为禽流感病毒亚单位疫苗研制、HA蛋白单克隆抗体制备提供前期基础。

• 单位
  华南农业大学; 生命科学学院; 华农（肇庆）生物产业技术研究院有限公司; 肇庆学院