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摘要
目的探讨氟暴露对小鼠神经母细胞瘤与大鼠神经胶质瘤融合细胞(NG108-15细胞)自噬及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、Unc-51样激酶1(ULK1)表达的影响。方法体外培养NG108-15细胞, 按照氟化钠终浓度分为对照组(0 mg/L)、低氟组(20 mg/L)、中氟组(40 mg/L)、高氟组(80 mg/L), 处理24 h后收集细胞备用。采用免疫荧光(IF)/免疫细胞化学(ICC)法检测细胞自噬情况(以磷酸氯喹处理为自噬阳性对照);实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞AMPK、mTOR、ULK1 mRNA表达水平;蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)、AMPK、mTOR、ULK1、磷酸化(p)-AMPK、p-mTOR、p-ULK1表达水平。结果对照组未检出自噬体, 各染氟组均检出自噬体;且低、中、高氟组LC3B蛋白表达水平(1.80 ± 0.59、2.16 ± 0.60、2.30 ± 0.57)均明显高于对照组(1.00 ± 0.29, 均P < 0.05)。qRT-PCR检测结果显示, 与对照组比较, 中、高氟组AMPK mRNA表达水平均较高(2.30 ± 0.57、4.41 ± 1.05比1.00 ± 0.01, 均P < 0.05);低、中、高氟组mTOR mRNA表达水平均较低(0.79 ± 0.04、0.76 ± 0.09、0.64 ± 0.10比1.00 ± 0.01, 均P < 0.05), ULK1 mRNA表达水平均较高(1.81 ± 0.39、1.96 ± 0.35、4.22 ± 1.03比1.00 ± 0.01, 均P < 0.05)。Western blot检测结果显示, 与对照组比较, 低、中、高氟组AMPK(1.21 ± 0.05、1.20 ± 0.04、1.30 ± 0.07比1.00 ± 0.03), p-AMPK(1.12 ± 0.05、1.20 ± 0.06、1.49 ± 0.07比1.00 ± 0.02), ULK1(1.16 ± 0.05、1.26 ± 0.05、1.15 ± 0.05比1.00 ± 0.04)及p-ULK1蛋白表达水平均较高(1.19 ± 0.04、1.17 ± 0.02, 1.24 ± 0.05比1.00 ± 0.05, 均P < 0.05), mTOR蛋白表达水平均较低(0.77 ± 0.03、0.60 ± 0.03、0.55 ± 0.04比1.00 ± 0.04, 均P < 0.05);中、高氟组p-mTOR蛋白表达水平均较低(0.93 ± 0.05、0.48 ± 0.02比1.00 ± 0.02, 均P < 0.05)。结论氟暴露可致NG108-15细胞发生自噬, AMPK、ULK1表达上调, 而mTOR表达下调。
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