高灵敏度黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备及其在中药材酸枣仁污染快速检测中的应用

作者：蒋佳伊; 张磊; 秦露; 骆骄阳; 付延伟; 秦家安; 王长健; 欧阳臻^*; 杨美华^*

来源：中国中药杂志, 2020, 45(16): 3900-3907.

DOI：10.19540/j.cnki.cjcmm.20200522.201

• 黄曲霉毒素B1
• 单克隆抗体
• ic-ELISA
• 酸枣仁

该研究制备了一种高灵敏度的黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)单克隆抗体并基于该抗体建立间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competition enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA),用于中药材中AFB1污染的高通量、快速筛查,以保障中药用药安全性。研究中以改进的肟化法修饰AFB1后,用EDC-NHS法偶联载体蛋白获得AFB1完全抗原,更加简便且减少环境污染。并利用加大免疫剂量、多种方式注射等对Balb/c雌鼠进行免疫,最终制备得AFB1单克隆抗体。通过对其免疫特性进行鉴定,结果显示该AFB1单克隆抗体属于IgG2b型免疫球蛋白,其灵敏度(IC50)可达0.15μg·L-1,亲和力为2.81×108 L·mol-1,与AFB2,AFG1和AFG2交叉反应率分别为35.07%,8.75%,1.15%,且与其他类真菌毒素几乎不存在交叉反应。基于该高灵敏度、高特异性抗体建立了ic-ELISA法,并用于中药材酸枣仁样品的检测。采用基质匹配的标准曲线进行计算,AFB1在0.05～0.58μg·L-1线性良好(R2=0.992),加样回收率为88.00%～119.0%,检测限为1.69μg·kg-1。采用所建立的方法测定了33批酸枣仁样品中AFB1的污染情况,其污染水平为3.62～206.58μg·kg-1,其检测结果与UHPLC-MS/MS测定结果的线性相关系数为0.996,并且无假阳性和假阴性情况,表明所建立的ic-ELISA准确、可靠,可为中药材酸枣仁中AFB1污染的快筛提供一种简便、有效的技术手段,同时可为其他中药中AFB1的检测与监控提供参考。

• 单位
  中国医学科学院药用植物研究所; 江苏大学; 中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室