柔嫩艾美耳球虫微线4N端蛋白序列分析与真核表达

作者：王黎霞; 张鹏; 张建军; 安健^*

来源：北京农学院学报, 2021, 36(03): 62-66.

DOI：10.13473/j.cnki.issn.1002-3186.2021.0311

• 柔嫩艾美耳球虫
• 毕赤酵母
• 微线4N端蛋白
• 序列分析
• 真核表达

【目的】为了获得重组柔嫩艾美耳球虫微线4N端蛋白。【方法】根据Genebank设计柔嫩艾美耳球虫微线4N端基因特异引物,RT-PCR扩增该基因,经Blast与Genebank公布的该基因比对,而后构建该蛋白的真核表达载体pPICZαA/EtMIC4N,用毕赤酵母表达系统小规模表达该蛋白,利用SDS-PAGE和Western Blot对表达的蛋白鉴定,再以摇瓶的方式进行大规模表达。【结果】RT-PCR扩增获得柔嫩艾美耳球虫微线4N端基因序列,大小为773 bp,经比较,与目的基因开放阅读框相似度99.5%,其中有4个碱基发生突变,1个gap。PCR证实成功构建真核表达载体,电转后的毕赤酵母用甲醇诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot发现在上清中有45 kD的条带,说明成功表达该蛋白,且该表达系统可持续获得较高纯度的目的蛋白,以摇瓶的方式进行大规模表达,每升能够纯化到约10 mg的目的蛋白。【结论】毕赤酵母成功表达重组柔嫩艾美耳球虫微线4N端蛋白,为该蛋白免疫原性的研究奠定基础。

• 单位
  北京农业职业学院; 北京农学院