转染突变型α-半乳糖苷酶A基因诱导细胞自噬异常及其作用机制探讨

作者：徐春晓; 刘靖; 康曼德; 赵亚雯; 张巍; 王朝霞; 袁云

来源：中华神经科杂志, 2015, 48(07): 551-555.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1006-7876.2015.07.003

• 法布里病
• α半乳糖苷酶
• 微管相关蛋白质类
• 自噬
• 凋亡调节蛋白质类

目的研究α-半乳糖苷酶A(GLA)基因突变对细胞自噬水平的影响,并初步探讨其作用机制。方法选取通过超微病理检查、GLA活性检测和GLA基因突变筛查确诊的两个法布里病家系,分别构建两个家系GLA基因突变型重组表达质粒[pcDNA3.1-GFP-ex1(EX1组),pcDNA3.1-GFPex3(EX3组)]及GLA野生型重组表达质粒(pcDNA3.1-GFP-GLA,GLA组),利用脂质体法将重组表达质粒瞬时转染至Hela细胞中培养。对照组为未进行转染的Hela细胞系。利用实时PCR及Western印迹法检测各组自噬基因及自噬途径相关蛋白(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ,Beclin-1,P62/SQSTM1)的表达。结果 EX1组、EX3组、GLA组和对照组LC3半定量值分别为1.495±0.064、1.490±0.020、1.285±0.021、1.260±0.042;P62/SQSTM1半定量值分别为0.555±0.086、0.480±0.084、0.785±0.439、0.980±0.278;Beclin-1 mRNA 2-△CT值分别为0.011±0.003、0.008±0.002、0.005±0.001、0.003±0.001;Beclin-1蛋白半定量值分别为1.178±0.098、1.209±0.092、0.931±0.100、0.796±0.184。与野生型相比,两组转染突变型GLA组中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ水平上调(t=5.118、4.984,P=0.007、0.008),多聚泛素结合蛋白P62/SQSTM1表达水平差异无统计学意义(t=1.052、1.400,P=0.323、0.199),自噬基因Beclin-1 mRNA(t=3.800、2.445,P=0.005、0.040)及蛋白(t=2.424、2.729,P=0.042、0.026)表达水平均上调。结论突变GLA基因可诱导细胞自噬水平上调,并可能通过Beclin-1依赖性信号通路诱导细胞自噬活化。

• 单位
  北京大学第一医院; 神经内科