鸭肠炎病毒UL41基因缺失株的构建及其体外增殖能力分析

作者：杨伏春; 刘芮; 李晓涵; 高立; 刘长军; 祁小乐; 崔红玉; 王笑梅; 高玉龙^*; 李凯^*

来源：畜牧兽医学报, 2022, 53(08): 2689-2696.

• 鸭肠炎病毒
• UL41基因
• 基因缺失
• 复制能力

旨在构建鸭肠炎病毒(DEV)UL41基因缺失毒株，并对其生物学特性进行分析，本研究以克隆有DEV UL41基因的重组黏粒D1为骨架，利用Red/ET重组技术构建缺失UL41基因的重组黏粒D1 dUL41;将UL41基因缺失重组黏粒D1 dUL41与其他4个克隆有DEV基因组片段的亲本黏粒共转染鸭胚成纤维细胞(DEF),拯救获得UL41基因缺失毒株rDEV-SD19/dUL41。将该基因缺失病毒感染DEF后，提取病毒基因组进行PCR鉴定及测序，并利用间接免疫荧光试验检测该病毒感染细胞中UL41基因表达情况；绘制拯救的基因缺失病毒的生长曲线，分析其体外复制特性。PCR及测序结果显示，本研究成功构建了缺失UL41基因的重组黏粒D1 dUL41。将该基因缺失黏粒与其他含有DEV基因组的亲本黏粒共转染DEF后能够产生典型的蚀斑病变。PCR及测序结果显示，UL41基因成功从DEV基因组中缺失；间接免疫荧光试验发现，基因缺失病毒rDEV-SD19/dUL41感染DEF后，未见UL41蛋白表达。综上表明，本研究成功构建了DEV UL41基因缺失病毒。体外生长曲线显示，rDEV-SD19/dUL41在DEF中的复制能力明显低于亲本病毒，提示UL41蛋白在DEV复制中发挥重要作用。UL41基因缺失DEV的构建为进一步研究UL41基因在DEV感染和致病中的作用机制奠定了基础。

• 单位
  兽医生物技术国家重点实验室; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所