大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷联合去甲斑蝥素体内外抗肿瘤作用及其机制

作者：余悦华; 严亦舒; 赵岩; 孙震晓^*

来源：中国药理学与毒理学杂志, 2023, 37(05): 343-352.

• 大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷
• 去甲斑蝥素
• 联合用药
• 序贯给药
• 肝癌
• 细胞凋亡
• 胱天蛋白酶3

目的 探究大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷(EG)与去甲斑蝥素(NCTD)联用的抗肿瘤作用及机制。方法(1) EG和NCTD与人肝癌HepG2细胞和人肺癌A549细胞作用48 h。给药方案：EG和NCTD分别单用(终浓度均为60～960μmol·L-1)、同时联用(EG+NCTD,1∶1同时给药，终浓度分别为30～480μmol·L-1)、序贯联用方案Ⅰ(EG→NCTD,EG作用24 h后除去EG，加入NCTD继续作用24 h，终浓度均为60～960μmol·L-1)和序贯联用方案Ⅱ(NCTD→EG,NCTD作用24 h后除去NCTD，加入EG继续作用24 h，终浓度均为60～960μmol·L-1)。MTT法检测细胞存活率，并计算相应的联合指数(CI)值，判断药物联合作用效应。随后利用反向找靶技术并构建蛋白-蛋白互作(PPI)网络筛选两药联用潜在的关键靶点。流式细胞术分析EG和NCTD单用及NCTD→EG序贯联用对HepG2和A549细胞凋亡的影响，Western印迹法检测胱天蛋白酶3(CASP3)和活化CASP3蛋白表达。(2)建立肝癌H22移植瘤小鼠模型，设模型对照(给予PBS)、5-氟脲嘧啶(5-Fu)阳性对照(30 mg·kg-1)、EG单用(4 mg·kg-1)、NCTD单用(4 mg·kg-1)、两药同时联用(EG+NCTD，各2 mg·kg-1)及序贯联用(NCTD→EG,NCTD 4 mg·kg-16 d,EG 4 mg·kg-16 d)组，均ip给药，每天1次，共12 d。末次给药后24 h小鼠称重后处死，剥离移植瘤组织称重，计算肿瘤抑制率。结果 (1)EG和NCTD单用、同时联用及2种方案序贯联用均呈浓度依赖性抑制HepG2和A549细胞存活(P<0.01)，在一定浓度范围内具有协同作用。EG和NCTD单用及同时联用三者比较，NCTD单用IC50最低，同时联用未表现出更好的作用。与两者单用比较，NCTD→EG序贯联用IC50最低。基于反向找靶及PPI分析筛选出关键靶点CASP3，表明两药联用可能涉及细胞凋亡通路。流式细胞术和Western印迹实验结果表明，与EG和NCTD单用组相比，NCTD→EG序贯联用明显增加HepG2和A549细胞凋亡率(P<0.01)，且活化CASP3蛋白表达增加(P<0.01)，而CASP3蛋白表达无明显变化。(2)肝癌H22移植瘤模型小鼠体内实验结果表明，与模型对照组相比，NCTD单用、同时联用、NCTD→EG序贯联用和5-Fu阳性对照组瘤重均显著降低(P<0.05)，抑瘤率分别为42.4%,47.8%,50.4%和69.0%;EG单用抑瘤作用不明显。同时联用组小鼠体重较模型对照组升高(P<0.05),5-Fu组显著降低(P<0.01)。结论 EG与NCTD联用具有协同抗肿瘤作用，其机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关。

• 单位
  北京中医药大学; 生命科学学院