RNA干扰技术抑制人恶性黑素瘤细胞A375中淋巴样增强因子mRNA及蛋白表达

作者：殷河慧; 廖文俊; 王岩; 谢杨新; 高天文

来源：中华皮肤科杂志, 2006, (04): 200-203.

• RNA干扰
• 黑色素瘤
• 基因表达
• 淋巴样增强因子

目的利用RNA干扰技术,以淋巴样增强因子(LEF-1)为靶基因,设计、构建重组体,研究其对人恶性黑素瘤细胞A375中LFF-1表达的抑制作用。方法设计、合成针对LEF-1 mRNA序列的有小发夹结构的正义和反义寡核苷酸,退火后与表达载体Psilencer3．1-H1 neo相连接,经鉴定正确后转染人恶性黑素瘤细胞A375,以G418筛选,获得稳定转染细胞株,分别以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)和免疫细胞化学方法检测转染细胞中LEF-1 mRNA及蛋白表达水平的改变。结果成功构建了靶向人LEF-1基因的siRNA表达载体,获得稳定转染细胞株,转染细胞LEF-1 mRNA 及蛋白水平明显下调。结论靶向LEF-1的RNA干扰重组体可抑制人恶性黑素瘤细胞A375中LEF-1 表达。

• 单位
  第四军医大学; 西京医院