切应力通过Pim1/Akt调节人脐静脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶Ser633和Ser1177位点磷酸化

作者：杜大鹏; 孙玉; 张敏; 王汉琴^*

来源：解剖学报, 2023, 54(05): 546-552.

DOI：10.16098/j.issn.0529-1356.2023.05.007

• 切应力
• Pim1
• 内皮细胞
• 内皮型一氧化氮合酶
• 免疫印迹法
• 人

目的 探讨不同模式的血流切应力对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)Pim1表达的影响，以及对内皮型一氧化氮合酶(eNOS)Ser1177和Ser633位点磷酸化的调控作用。方法 体外原代培养的HUVECs,采用平行平板流动腔系统给HUVECs分别施加15 dyn/cm2层流切应力(LSS)和(0.5±4)dyn/cm2振荡切应力(OSS),Western blotting法检测Pim1、Akt和Akt Ser473磷酸化、eNOS、eNOS Ser1177和Ser633位点磷酸化蛋白表达。用特异性小干扰RNA(siRNA)技术分别敲低HUVECs中Pim1和Akt进行干预。结果 与OSS刺激相比较，LSS显著上调HUVECs中Pim1蛋白表达水平(P<0.01),同时，Akt Ser473磷酸化、eNOS Ser633和Ser1177位点磷酸化蛋白表达增加(P<0.05或P<0.01); siPim1和Pim1特异性抑制剂SMI-4a干预后，LSS诱导的Pim1蛋白表达显著被抑制(P<0.05),同时Akt Ser473磷酸化、eNOS Ser633和Ser1177位点磷酸化蛋白表达均降低(P<0.05或P<0.01)。敲低Akt, LSS诱导的Akt Ser473磷酸化蛋白表达显著被抑制(P<0.05),同时也显著抑制LSS上调的eNOS Ser633和Ser1177磷酸化蛋白表达(P<0.05),而对LSS上调的Pim1表达无影响(P>0.05)。结论 切应力可以通过Pim1/Akt信号通路调节HUVECs eNOS Ser633和Ser1177位点磷酸化。

• 单位
  湖北医药学院; 基础医学院; 解剖学教研室