PinX1的原核表达、纯化及其与hTERT的相互作用

作者：廉攀峰; 程龙; 关鑫; 邹大阳; 梅玲; 李俊杰; 张菊会; 王恩群; 叶棋浓

来源：生物技术通讯, 2014, 25(01): 42-48.

• 人Pin2/TRF1结合蛋白X1
• 原核表达
• 人端粒酶逆转录酶

目的:原核表达人Pin2/TRF1结合蛋白X1(PinX1),确定该蛋白与人端粒酶逆转录酶(hTERT)催化亚基的相互作用。方法:用PCR方法从乳腺文库中扩增PinX1基因的编码序列,克隆至pET-32a载体构建重组质粒pHisPinX1,经双酶切鉴定后转化大肠杆菌BL21并进行诱导表达,SDS-PAGE和Western印迹检测His-PinX1的表达;用His磁珠纯化His-PinX1,在人肾胚细胞293T内检测His-PinX1与hTERT的相互作用。结果:扩增得到980 bp的PinX1基因;Western印迹检测表明,相对分子质量约57×103的His-PinX1获得表达,且纯化的His-PinX1与hTERT具有相互作用。结论:表达并纯化得到了与hTERT相互作用的His-PinX1,为深入研究PinX1的功能奠定了基础。

• 单位
  军事医学科学院; 安庆市立医院; 安徽医科大学