非洲猪瘟病毒D1133L蛋白增加宿主波形蛋白磷酸化而促进病毒在猪巨噬细胞中的复制

作者：陈玲玲; 张婷; 郝雨; 杨金柯; 史喜绢; 张大俊; 杨行; 赵登率; 闫文倩; 别鑫恬; 陈国辉; 郑海学; 乐涛^*; 张克山^*

来源：微生物学报, 2023, 1-16.

DOI：10.13343/j.cnki.wsxb.20230486

• 非洲猪瘟病毒
• D1133L蛋白
• 波形蛋白
• 蛋白互作
• 磷酸化

非洲猪瘟(Africanswinefever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(Africanswinefevervirus，ASFV)感染引起家猪和野猪的一种高死亡率的传染性疾病。ASFV具有庞大的基因组，其中非结构蛋白pD1133L被预测为其编码的6个解旋酶之一。本实验室应用IP-MASS技术筛选与pD1133L互作的宿主细胞蛋白，发现细胞波形蛋白(vimentin，VIM)为pD1133L互作的宿主蛋白之一，但尚不清楚宿主蛋白VIM对ASFV复制的影响。【目的】探究ASFV与VIM的相互调控作用，初步揭示VIM促进ASFV复制的机制。【方法】通过Co-IP试验验证pD1133L与VIM存在互作关系；外源过表达VIM蛋白以及设计并合成VIM的siRNA探究 VIM对ASFV复制的影响；利用western blotting以及荧光定量PCR(Quantitative PCR，qPCR)方法检测ASFV对VIM蛋白水平以及转录水平的影响；通过western blotting、间接免疫荧光试验(Immunofluorescence assay，IFA)探究巨噬细胞感染ASFV后VIM磷酸化水平变化以及亚细胞定位变化情况；CCK-8试剂盒检测VIM磷酸化抑制剂KN-93 处理的最佳浓度，并利用western blotting以及IFA检测KN-93对VIM磷酸化、亚细胞定位以及对ASFV复制影响。【结果】VIM过表达促进ASFV复制，敲低VIM的表达则抑制ASFV复制；ASFV感染抑制VIM蛋白水平以及转录水平表达，且呈时间依赖性；ASFV感染后VIM发生磷酸化修饰且发生亚细胞定位改变，从而促进ASFV复制。【结论】证实了ASFV与宿主蛋白VIM之间的相互调控作用；初步确定ASFV感染后VIM受到ASFV pD1133L调控，亚细胞定位发生重排向核周聚集从而促进ASFV复制的机制。

• 单位
  重庆师范大学; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 兰州大学; 生命科学学院