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摘要
目的观察英夫利昔单抗(IFX)对创伤性脑损伤(TBI)小鼠神经功能的影响及核因子κB/诱导型一氧化氮合酶(NF-κB/iNOS)信号通路在其中的作用。方法采用随机数字表法将72只健康成年雄性C57BL/6小鼠分为假手术组(sham组)、TBI组及TBI+IFX组, 每组24只;后2组小鼠采用控制性皮质撞击法建立TBI模型, TBI+IFX组在造模后30 min经腹腔注射IFX(溶于生理盐水中, 浓度为2.5 mg/mL, 剂量为10 μg/g), 1次/d, 共给药3 d。sham组和TBI组分别于相同时间点经腹腔注射等量生理盐水。分别于造模后第1、3、7天应用Garcia评分进行神经功能缺损程度评估;在造模后第3天采用伊文思蓝染色及干湿重法检测血脑屏障通透性及脑组织含水量;采用尼氏染色、Tunel染色检测脑组织中损伤神经元及凋亡神经元比例;采用免疫荧光双标染色检测神经元中caspase-3、神经元核抗原(NeuN)的表达情况;采用免疫组化染色检测小胶质细胞标志物离子钙接头分子-1(Iba-1)表达情况;采用ELISA法检测脑组织中炎性因子[肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-1β、IL-6、干扰素(IFN)-γ]和自由基[氧自由基(ROS)、氮自由基(RNS)]的含量;同时采用免疫荧光染色和Western blotting实验检测NF-κB、iNOS的表达。结果 (1)造模后第1、3、7天, 3组小鼠Garcia评分差异均有统计学意义(P<0.05)。与TBI组小鼠比较, TBI+IFX组小鼠造模后第3、7天Garcia评分明显提高, 差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)造模后第3天, 与TBI组比较, TBI+IFX组小鼠的伊文思蓝渗出量[(18.45±1.32) μg/gvs. (16.38±1.25) μg/g]及脑组织含水量[(81.56±0.96)%vs. (79.97±0.79)%]均明显下降, 差异有统计学意义(P<0.05)。造模后第3天, 与TBI组比较, TBI+IFX组小鼠中损伤神经元比例[(79.50±5.85)%vs. (68.81±7.47)%]、凋亡神经元比例[(41.93±7.49)%vs. (30.59±8.60)%]均明显下降, 差异有统计学意义(P<0.05)。(3)造模后第3天, 免疫荧光双标染色结果显示, 与TBI组比较, TBI+IFX组小鼠神经元中caspase-3相对表达量(1.11±0.23vs. 0.76±0.16)明显下降, 差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化染色及ELISA法结果显示, 与TBI组比较, TBI+IFX组小鼠损伤侧脑组织的Iba-1染色评分、炎性因子(TNF-α、IL-1β、IL6和IFN-γ)和自由基(ROS和RNS)的含量均明显下降, 差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光染色及Western blotting实验结果显示, 与TBI组比较, TBI+IFX组小鼠NF-κB p65、iNOS和磷酸化NF-κB抑制蛋白α表达明显减少, NF-κB核转位也受到抑制, 差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 IFX有助于减轻炎症反应及氧化应激反应, 发挥神经保护作用, 其机制与抑制下游的NF-κB/iNOS通路激活有关。
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