RNAi非特异效应的干扰素反应探讨

作者：梁永刚; 刘红雨; 刘宝兴; 白云; 吴蘅; 周清华; 陈军

来源：中国肺癌杂志, 2010, 12(01): 16-22.

• RNAi
• FLJ20420
• 干扰素反应
• 干扰素激活基因

背景与目的RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一项针对转录后特异序列基因沉默的技术,可用于调控基因表达和研究基因功能。但该技术引发的非特异效应也越来越受到重视。其中,干扰素反应为RNAi非特异效应的主要类型之一。本文拟探讨在RNA干扰实验中干扰素反应的检测。方法在A549人肺癌细胞株中应用基因转染技术研究5个不同的FLJ20420 siRNA对FLJ20420基因沉默情况;应用real-time PCR和基因芯片技术相结合,分别检测经2个不同FLJ20420-siRNA干扰后A549细胞中干扰素激活基因(ISGs)表达谱的变化情况。结果①在A549细胞中,5个不同的FLJ20420-siRNA可不同程度地对目的基因起到沉默作用,其中FLJ20420-siRNA-1和FLJ20420-siRNA-4两个的沉默效果最佳,分别为80%和90%;②应用real-timePCR检测与干扰素反应激活相关的16个主要标志性基因发现,A549-FLJ-siRNA-1细胞中有14个基因的表达明显上调;而A549-FLJ-siRNA-4细胞中仅有2个基因的表达变化差异具有显著性,提示在A549-FLJ-siRNA-1细胞中发生了RNAi的非特异性效应;③基因芯片分析发现在A549-FLJ-siRNA-1细胞中有51个干扰素激活基因(ISGs)表达上调2倍以上(P<0.05),而在A549-FLJ-siRNA-4细胞中仅有6个干扰素激活基因(ISGs)表达上调2倍以上(P<0.05),从而证实了A549-FLJ-siRNA-1细胞中存在RNAi的非特异性效应干扰素反应。结论在进行RNAi实验时,siRNA不仅能针对目的基因产生沉默效果,也可同时诱发干扰素反应。应用real-time PCR对于主要的干扰素激活基因(ISGs)的mRNA表达变化的检测将有助于发现RNAi非特异效应干扰素反应。

• 单位
  天津医科大学总医院; 四川大学