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摘要
目的：胶质瘤是最常见的颅内原发性肿瘤，目前仍无理想的治疗手段，基因治疗作为胶质瘤治疗的新方法之一近年来备受关注，但因缺少有效的递送载体，从而使其在胶质瘤治疗中的应用仍十分有限。本研究旨在探讨用胶质瘤细胞来源胞外囊泡(extracellular vessel,EV)制作的仿生纳米材料靶向递送基因药物STAT3-siRNA来治疗胶质瘤的可行性。方法：首先通过超速离心法提取胶质瘤细胞U251来源的EV(U251 glioma cells derived EV,EVU251)，采用纳米粒子跟踪分析法对其粒径分布进行表征分析，透射电镜进行形貌分析，蛋白质印迹法验证其表面特征蛋白的表达；使用膜染料试剂盒PKH67将EVU251标记后，通过细胞摄取实验验证其靶向U251的归巢能力；采用低渗法去除EVU251的内容物，并通过微孔膜制备EVU251囊泡(EVU251 memberane,EVMU251)；采用电转染法将EVMU251中载入靶向信号转导与转录活化因子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)(STAT3-siRNA)制成仿生纳米材料EVMU251@STAT3-siRNA；使用real-time PCR对成功包载的siRNA进行定量分析，并计算包载率及载药率；采用荧光染料CY5标记siRNA后，通过细胞摄取实验评价仿生纳米材料EVMU251@CY5-siRNA靶向U251细胞的能力，再结合绿色溶酶体示踪剂评价该仿生纳米材料的溶酶体逃逸能力；最后通过体外细胞实验分别检测EVMU251@STAT3-siRNA敲低STAT3 mRNA表达水平以及选择性杀伤U251的能力。结果：EVU251粒径分布范围为50～200 nm，呈天然的圆盘形态，并且在其膜上检测到EV标志性蛋白质的表达。细胞摄取实验证明其具有靶向U251的归巢能力。将EVU251制备为EVMU251@STAT3-siRNA后，粒径变为(177.9±5.0) nm,siRNA包载率为(33.5±2.2)%。细胞摄取实验证明其仍具有靶向U251细胞的能力，且能成功避开溶酶体降解而将siRNA递送至胞质。体外细胞实验证明EVMU251@STAT3-siRNA能有效敲低U251细胞STAT3基因的表达，并能对U251细胞产生选择性杀伤。结论：用EVU251制作的仿生纳米材料EVMU251@STAT3-siRNA能选择性敲低U251细胞STAT3基因的表达，并能产生选择性杀伤作用，可为胶质瘤的基因治疗提供新思路。
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