黄毛草莓F-box蛋白基因FnFBOX1及其启动子的克隆和表达分析

作者：时雅倩; 申亚茹; 陈漫影; 何淑敏; 刘予涵; 何天楠; 陈清西; 文志丰^*

来源：生物技术通报, 2022, 38(02): 44-56.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2021-0295

• 黄毛草莓
• 炭疽病
• FnFBOX1
• 启动子
• 表达分析

探索黄毛草莓FnFBOX1参与草莓胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)侵染过程中的抗病反应和pFnFBOX1启动子的转录活性，为研究FnFBOX1抗炭疽病功能奠定基础。以黄毛草莓(Fragaria nilgerrensis Schidl.)为研究对象，通过RT-PCR技术克隆FnFBOX1的cDNA序列。通过氨基酸序列比对、进化树分析、亚细胞定位、启动子克隆并构建瞬时表达载体、组织特异性表达分析，最后用荧光定量分析了抗病的黄毛草莓和感病的‘妙香 3’草莓在水杨酸(SA)和胶孢炭疽菌胁迫下FnFBOX1的表达水平变化。结果表明，FnFBOX1的ORF全长为1 227 bp，编码408个氨基酸。氨基酸序列比对和进化树分析发现FnFBOX1与森林草莓(Fragaria vesca)FvFBOX1同源性最高。亚细胞定位结果显示FnFBOX1定位于细胞核。克隆的FnFBOX1启动子长度为821 bp，构建pFnFBOX1的瞬时表达载体pFnFBOX1∷GUS。瞬时转化烟草后对其进行组织化学染色分析和GUS活性测定，结果表明，pFnFBOX1具有驱动下游基因转录的活性，且胶孢炭疽菌和SA可促进FnFBOX1启动子启动的GUS活性的提高。荧光定量PCR分析表明，FnFBOX1在黄毛草莓的不同组织中均有表达。抗病黄毛草莓和感病‘妙香 3’草莓均进行接种胶孢炭疽菌和喷施SA处理，结果显示，黄毛草莓接种胶孢炭疽菌12 h后FnFBOX1表达量达到最高，是0 h的6.3倍；SA处理24 h时，其表达量达到最高，是0 h的7.9倍。‘妙香 3’草莓也响应胶孢炭疽菌和SA处理，但FBOX1表达量比黄毛草莓低。

• 单位
  福建农林大学