人hepcidin真核表达载体的构建及稳定转染细胞系的建立

作者：曾芳; 卢银平; 王凯平

来源：华中科技大学学报(医学版), 2010, (04): 524-527.

• 人hepcidin
• 真核表达
• 全长结构基因
• 稳定转染 human hepcidin
• eukaryotic expression
• full-length structural gene
• stable transfection

目的构建人hepcidin全长结构基因真核表达载体,建立稳定高表达hepcidin的HepG2细胞系,以应用于拮抗hepcidin从而增强铁吸收的活性药物筛选。方法化学合成结合PCR拼接hepcidin全长结构基因,插入原核表达载体pMD18-T中,测序正确后再经HindⅢ与EcoRⅠ双酶切,定向插入真核表达载体pcDNA3.0内,酶切鉴定后,采用脂质体转染法将重组质粒转染人HepG2细胞,G418选择抗性细胞克隆,ELISA检测转染细胞hepcidin的蛋白表达。结果经酶切鉴定,成功构建hepcidin真核表达载体pcDNA3-hepcidin;重组质粒转染HepG2,经G418筛选3周获得...

• 单位
  华中科技大学同济医学院; 华中科技大学同济医学院附属协和医院