非洲猪瘟病毒抗体化学发光检测方法的建立与应用

作者：向国庆; 孙菁晗; 宋帅; 温肖会; 吕殿红; 贾春玲; 牛瑞辉; 顾有方; 罗胜军

来源：中国畜牧兽医, 2024, 51(04): 1362-1371.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2024.04.004

• 非洲猪瘟病毒(ASFV)
• 重组p72蛋白
• 化学发光
• 抗体

【目的】建立一种特异性强、敏感度高、操作简捷、高通量的非洲猪瘟病毒(African swine fever, ASFV)抗体化学发光检测方法，用于早期监测ASFV的流行情况。【方法】本研究以羧基磁珠作为固相载体偶联ASFV重组p72蛋白，用适量的牛血清白蛋白(BSA)进行封闭，加入检测样品进行反应，以兔抗猪IgG-AP抗体作为酶标抗体，加入相应底物进行显色，优化各项反应条件，建立ASFV抗体化学发光检测方法，并对该方法的特异性、敏感度、重复性和检出率进行验证。【结果】建立的ASFV抗体化学发光检测方法蛋白与羧基磁珠偶联最适pH为7.0,最佳蛋白偶联浓度为5μg/mL,使用10%BSA溶液封闭效果最佳，反应磁珠终浓度为1.00 mg/mL,酶标二抗最佳工作稀释度为1∶40 000。同时该方法反应时间为30 min,血清稀释度为1∶512,敏感度高于商品化ASFV抗体ELISA检测试剂盒，与猪瘟病毒、A型口蹄疫病毒、O型口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病病毒gE、猪伪狂犬病病毒gB抗体阳性标准血清均无交叉反应。重复性试验中，批内变异系数为4.41%～8.70%,批间变异系数为2.43%～8.07%,均<10%。通过检测120份血清样品并与商业化ASFV抗体ELISA检测试剂盒进行对比分析，商业化ELISA试剂盒检出率为96.7%,本研究建立的化学发光检测方法检出率为100%。【结论】本研究建立的ASFV抗体化学发光检测方法可用于ASFV感染后抗体水平检测，为后续试剂盒的开发提供参考。

• 单位
  安徽科技学院; 动物科学学院; 广东省农业科学院动物卫生研究所