siRNA沉默ADAM10基因对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡的影响

作者：王培; 楚天舒; 阎磊; 刘冰; 朱清; 邵凤民^*

来源：中国医药生物技术, 2019, 14(02): 136-141.

• 关节炎,类风湿
• 滑膜成纤维细胞
• 解整合素金属蛋白酶10
• 细胞凋亡

目的探讨小干扰RNA(siRNA)沉默解整合素金属蛋白酶(ADAM10)基因对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡的影响。方法将ADAM10特异性siRNA转染人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MH7A细胞,实验分为3组,ADAM10-siRNA组转染ADAM10特异性siRNA,NC-siRNA组转染ADAM10非特异性siRNA,对照组为未经转染处理的MH7A细胞。转染48 h后采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中ADAM10表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,qRT-PCR检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平,ELISA测定细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)含量。结果 ADAM10-siRNA组细胞中ADAM10 mRNA和蛋白表达水平较NC-siRNA组和对照组低(P <0.05)。沉默ADAM10基因后,ADAM10-siRNA组细胞凋亡率显著高于NC-siRNA组和对照组(P <0.05)。ADAM10-siRNA组细胞中Bax基因表达水平明显高于NC-siRNA组和对照组(P <0.05),Bcl-2基因表达水平明显低于NC-siRNA组和对照组(P <0.05)。ADAM10-siRNA组细胞分泌的TNF-α、IL-6和IL-8显著低于NC-siRNA组和对照组(P<0.05)。而NC-siRNA组和对照组以上各指标相比较,差异不明显(P> 0.05)。结论沉默ADAM10基因可明显促进类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的凋亡,并进一步减少TNF-α、IL-6和IL-8等炎症因子的分泌,提示通过沉默ADAM10基因使减轻/控制类风湿关节炎炎症成为可能。

• 单位
  河南省人民医院