全人源EGFR单抗的筛选和鉴定

作者：李姝萍; 杨斌; 金鑫; 王小珏; 闫卓红; 易玲; 韦攀健; 王和林; 郝建清; 张洪涛^*

来源：国际免疫学杂志, 2020, 43(03): 245-251.

• 肺癌
• 噬菌体抗体库
• 表皮生长因子受体
• 人源抗体

目的制备全人源表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)单克隆抗体, 为基于人EGFR靶点的肿瘤免疫调节治疗提供基础制剂。方法采集110例胸部肿瘤(肺癌102例, 乳腺癌8例)患者外周血, 构建噬菌体单链抗体库。经噬菌体展示后筛选阳性克隆, 测序并构建全长轻重链表达载体质粒, 共转染HEK293。通过亲和层析获得纯化抗体, 抗原抗体免疫反应测定抗体特异性和敏感性, 生物膜干涉(biolayer interferometry, BLI)技术测定抗体亲和力和流式细胞技术(fluorescence activating cell sorter, FACS)检测对肿瘤细胞系EGFR结合活性。结果成功构建肺癌单链抗体噬菌体库, 抗体库库容≥108, 筛选获得两株单抗, 分别为BTHG17-1, BTHG17-2, 酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)测定结合抗原敏感性为10 ng/mL, 亲和力在10-8 mol/L水平, 两抗体结合相同表位, 可特异性结合野生型EGFR和突变体EGFRvⅢ蛋白, 具有结合肺癌和神经胶质瘤细胞活性。结论获得较高亲和力全人源EGFR单链抗体(single-chain variable fragment, scFv), 具有EGFR(包括EGFRVⅢ)特异性, 为EGFR靶点封阻和免疫导向治疗研究提供一种新抗体工具。

• 单位
  中心实验室; 北京市结核病胸部肿瘤研究所; 新乡医学院第一附属医院; 首都医科大学附属北京胸科医院