维奈克拉增强MDS细胞系对地西他滨化疗敏感性机制的实验研究

作者：曲志梅; 董伟; 刘艳萍

来源：现代检验医学杂志, 2023, 38(03): 53-78.

• 维奈克拉
• 地西他滨
• 骨髓增生异常综合征
• 细胞凋亡
• 自噬

目的 研究维奈克拉（venetoclax,VCX）对骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes, MDS)细胞系地西他滨（decitabine,DAC）化疗敏感性的可能作用机制。方法 CCK-8法检测不同浓度VCX对MDS细胞（SKM-1和MUTZ-1细胞系）增殖活力的影响；将MUTZ-1细胞根据不同处理分为4组：对照组、VCX组、DAC组和VCX+DAC组；Annexin V-FITC/PI法检测各组细胞凋亡率；Western blotting检测细胞中凋亡相关蛋白[细胞色素C(cytochrome C)，裂解型半胱天冬酶3(cleaved Caspase-3)表达水平]，B细胞白血病/淋巴瘤2(B cell leukemia/lymphoma-2,Bcl-2)与Bcl-2相关蛋白X(Bax)比值；JC-1线粒体膜电位检测试剂盒检测各组SKM-1和MUTZ-1细胞的线粒体膜电位；H2DCF-DA荧光探针法检测细胞中活性氧（reactive oxygen species,ROS）含量；Western blotting检测细胞中自噬相关蛋白Beclin1,P62和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值。结果 随VCX浓度升高，MUTZ-1细胞增殖活性明显降低，且呈浓度依赖性（F=0.003,P=0.001）。与对照组（4.28%±1.66%）相比，VCX组（13.75%±3.02%）,DAC组（12.39%±4.16%）和VCX+DAC组（18.10%±3.50%）细胞凋亡率明显增高，差异有统计学意义（F=45.782,P<0.05）。与对照组（1.01±0.02,1.04±0.02,1.01±0.04）相比，VCX组（1.67±0.05,2.23±0.10,0.43±0.05）,DAC组（1.62±0.08,1.85±0.06,0.49±0.07）和VCX+DAC组（3.24±0.10,3.81±0.19,0.13±0.01）细胞中凋亡相关蛋白cytochrome C,cleaved Caspase-3蛋白表达及Bcl-2/Bax比值明显升高，差异均有统计学意义（F=116.384,282.069,248.035，均P<0.05）。与对照组（2.05±0.34,8.78±1.37）相比，VCX组（8.72±1.26,14.02±1.45）,DAC组（8.44±2.13,13.20±2.41）和VCX+DAC组（15.66±2.90,26.45±1.53）细胞线粒体膜电位及ROS含量明显升高，差异具有统计学意义（F=66.782,69.071，均P<0.05）。与对照组（1.05±0.04,1.02±0.08,1.01±0.07）相比，VCX组（1.62±0.15,2.60±0.19,0.56±0.15）,DAC组（1.67±0.17,2.45±0.20,0.54±0.14）和VCX+DAC组（3.72±0.21,3.58±0.27,0.13±0.09）自噬相关蛋白Beclin1,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达明显升高，而P62蛋白表达则明显降低，差异均有统计学意义（F=118.257,209.422,236.92，均P<0.05）。与DAC组比较，VCX+DAC组细胞凋亡率、cytochrome C,cleaved Caspase-3,Beclin1蛋白表达水平，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和ROS含量均明显降低（t=2.473,28.564,17.291,16.115,7.021,9.319）；线粒体膜电位、Bcl-2/Bax比值和P62蛋白表达均明显升高（t=4.621,9.244,4.278），差异具有统计学意义（均P <0.05）。DAC组和VCX组细胞中上述检测指标差异均无统计学意义（均P> 0.05）。结论 VCX可能通过调节细胞凋亡、自噬和氧化应激来促进MDS细胞对DAC的化疗敏感性。

• 单位
  山东第一医科大学