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摘要
目的:建立稳定表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的骨髓增生异常综合征转白血病的细胞株,评价其生物学特性及其应用。方法:以人骨髓增生异常综合征转化为白血病细胞系SKM-1为母系细胞,通过携带GFP基因的慢病毒进行转染,以有限稀释法获得GFP阳性的单细胞克隆,并将扩大培养后的细胞通过皮下注射的方式进一步在小鼠体内筛选,致瘤后将瘤块分离,继续进行培养,获得SKM-1/GFP细胞株。通过荧光倒置显微镜观察细胞形态,应用流式细胞术检测细胞荧光表达水平,应用CCK-8法检测细胞生长特性,将扩大培养后的SKM-1/GFP细胞接种在免疫缺陷小鼠的皮下,致瘤后观察瘤块以及各个脏器组织的浸润情况。结果:SKM-1/GFP细胞形态和生长特性与SKM-1母系细胞无差异,流式细胞术检测GFP的表达率为100%,体外CCK-8法检测生长曲线显示,SKM-1/GFP细胞与母系SKM-1细胞无明显差异。将SKM-1/GFP细胞接种于NOD/SCID小鼠皮下,14d时可见瘤块形成。30 d时,在荧光显微镜下观察荷瘤小鼠,可见瘤块自发荧光。在荧光显微镜下观察肿块冰冻切片,可见较为均一的GFP阳性细胞。冰冻切片显示,小鼠心、肝、胃、肾均有肿瘤细胞浸润。结论:成功建立了稳定表达GFP的骨髓增生异常综合征转白细胞株SKM-1/GFP,该细胞株可以灵敏地追踪肿瘤细胞,应用于微小残留病的研究,为研究骨髓增生异常综合征转化的急性白血病提供一个新的实验平台。
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