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摘要
目的探讨鼻咽癌细胞HONE1中抑制DNA修复的潜在机制。方法使用ETP处理鼻咽癌细胞HONE1造成DNA损伤后,通过高通量测序检测鼻咽癌细胞HONE1中miRNA的表达谱。过表达差异miRNA后,通过基于IPpo I的可诱导DSB系统检测DNA双链断裂处(DNA double-strand breaks,DSB)的DNA-PKcs含量。通过miRDB在线分析miRNA的潜在靶标。通过荧光素酶报告系统检测miRNA靶向mRNA。结果 ETP处理后hsa-miR-9983-3p、hsa-miR-4731-5p、hsa-miR-3675-5p、hsa-miR-516b-5p、hsa-miR-4437、hsa-miR-7114-5p、hsa-miR-637、hsa-miR-5008-5p的表达水平上升至少8倍。miR-516b-5p mimics导致DSB的DNA-PKcs含量减少(P <0.05),而miR-516b-5p inhibitor导致DSB的DNA-PKcs含量增加(P <0.05)。在鼻咽癌细胞HONE1中过表达miR-516b-5p后,ATM mRNA的表达水平和蛋白表达水平下降,DNA-PKcs的磷酸化水平下降;而抑制miR-516b-5p表达后,ATM mRNA的表达水平和蛋白表达水平上升,DNA-PKcs的磷酸化水平上升。同时,miR-516b-5p靶向ATM的3端非编码区。过表达ATM后,DSB的DNA-PKcs含量上升(P <0.05),而敲低ATM后,DSB的DNA-PKcs含量下降(P <0.05)。结论 miR-516b-5p通过靶向ATM mRNA的3端非编码区,降解了ATM mRNA,抑制了ATM的翻译,随后DNA-PKcs的磷酸化水平下降,DNA-PKcs与DSB的结合减少,最终抑制了鼻咽癌细胞HONE1的DNA修复。
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