摘要
目的观察缺氧对体外培养的大鼠星形胶质细胞的影响,探讨外源性血管内皮细胞生长因子(VEGF)对大鼠星形胶质细胞缺氧的保护作用及其可能的机制。方法体外原代培养大鼠脊髓星形胶质细胞并鉴定(胶质原纤维酸性蛋白GFAP阳性)。星形胶质细胞分别经不同时间的缺氧处理、缺氧处理前加入不同浓度(10~100 ng/m l)VEGF处理以及同时加入VEGF受体F lk-1阻断剂SU 1498处理后,应用光镜、细胞计数、M TT法、TUNEL标记及免疫组化技术检测星形胶质细胞形态、细胞增殖活性和凋亡、VEGF和F lk-1的表达改变。结果纯化培养1周的细胞,经鉴定其星形胶质细胞纯度达98%;8~12 h缺氧可明显诱导星形胶质细胞活化,表现为细胞胞体变大、胞突变粗、GFAP表达升高,细胞增殖活性降低、凋亡指数增加、VEGF和F lk-1表达增加;缺氧处理前20~24 h加入50 ng/m l VEGF可使细胞活力明显增强,细胞凋亡指数明显降低,细胞缺氧损伤明显改善;而700ng/m l SU 1498可明显阻断或抑制VEGF对星型胶质细胞的缺氧保护作用。结论缺氧可诱导大鼠星形胶质细胞反应性活化,外源性VEGF可能通过VEGF受体F lk-1发挥对大鼠星形胶质细胞的缺氧保护作用。
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单位四川大学华西医院