重组HIV-TATm-Survivin(T34A)蛋白制备及其促癌细胞凋亡活性研究

作者：郑文云; 马兴元; 魏东芝; 王锦之; 刘清海; 马昱澍; 杨胜利

来源：生物工程学报, 2006, (02): 285-292.

DOI：10.13345/j.cjb.2006.02.021

• 重组HIV-TATm-Survivin(T34A)突变体
• 表达纯化
• 促凋亡活性
• B-Cap-37和SW1990癌细胞系 recombinant HIV-TATm-Survivin (T34A)
• expression and purification
• pro-apoptosis bioactivity
• SW1990 and B-Cap-37 cancer cell lines

从人乳腺癌细胞系B-Cap-37中克隆出Survivin的cDNA,并对其中编码34位Thr的密码子定点突变为Ala的密码子后,经一系列基因操作方法将天然HIV-TAT转导肽的突变体基因HIV-TATm引入Survivin(T34A)基因的5′端,正确构建了表达载体pRSET-B-HIV-TATm-Survivin(T34A),经转化E.coliBL21(DE3)后诱导表达,目的蛋白质以包涵体形式表达,占菌体总蛋白的45%。经3.7L发酵罐分批发酵可收获650mg/L的包涵体,经阳离子交换、凝胶层析分离和柱上复性与透析,得到纯度达96%以上的可溶性目的蛋白HIV-TATm-Survivin(T...