干扰素刺激基因12a对寨卡病毒复制的影响及其作用机制

作者：朱安静; 李爽; 李玉佳; 李世林; 段晓琼; 杨春晖; 徐敏^*; 陈利民^*

来源：中国输血杂志, 2020, 33(05): 446-452.

DOI：10.13303/j.cjbt.issn.1004-549x.2020.05.008

• 寨卡病毒
• 干扰素刺激基因12a
• 干扰素β
• Janus酪氨酸激酶/信号传导转录激活因子信号通路

目的探究干扰素刺激基因(ISG)12a对寨卡病毒(ZIKV)复制的影响和作用机制。方法通过质粒转染(2μg ISG12a)或者siRNA(20μmo/Ll)沉默分别上调或者抑制A549细胞(细胞密度2×105/mL)中ISG12a的表达,再用ZIKV(MOI=1)感染A549细胞,48 h后收样,采用RT-qPCR以及Western blot等方法检测ZIKV的RNA的复制水平及宿主抗病毒先天免疫相关基因表达水平;将1μg含有干扰素刺激应答元件(ISRE)的萤火虫荧光报告质粒(ISRE-luc)和2 ng海肾荧光质粒(pRL-TK)与1μg的ISG12a质粒共转入2×105/mL的A549细胞中24 h,用ZIKV(MOI=1)感染A549细胞24 h,用终浓度为100 IU/mL IFNβ再处理细胞24 h后收样,用双荧光报告基因试验检测ISRE活性;在2×105/mL的A549细胞中转染2μg ISG12a质粒,24 h后用ZIKV(MOI=1)感染A549细胞24 h,用终浓度为100 IU/mL IFNβ再处理细胞24 h后收样,采用RT-qPCR检测各组(n=3)的ISG12a和ZIKV RNA的表达。结果过表达ISG12a或者沉默ISG12a使得实验组的ZIKV RNA相对于空载组的值为:0.438 8±0.011 3、1.884 0±0.176 7(P<0.01),使IFNβ及MDA5、RIG-I、TLR3、IFIT1、ISG15、MxA各组(n=3)的相对值为:1.925 2±0.294 0、3.847 1±0.245 3、3.535 2±0.461 3、3.584 0±0.243 2、17.304 3±0.963 7、19.393 5±5.074 6、21.909 3±1.941 6(P<0.01或<0.05);在感染ZIKV的情况下,过表达ISG12a后,用IFNβ处理细胞,与空载组相比,实验组的ZIKV RNA的相对值为:218.723 3±0.329 9、2.330 6±0.080 6(P<0.01),与不加IFNβ处理的实验组相比,加干扰素处理的实验组的ZIKV RNA的相对值为:1.312 9±0.010 4(P<0.05)。结论 ISG12a通过促进内源性IFNβ的产生和激活Ⅰ型干扰素信号通路从而抑制ZIKV的复制,并增强外源性IFNβ抗ZIKV活性。

• 单位
  中国医学科学院北京协和医学院