猪γ-干扰素的克隆表达及单抗的潜在应用

作者：娄忠子; 兰喜; 李建强; 李学瑞; 李志勇; 殷相平; 柳纪省

来源：生物技术通报, 2010, (01): 173-179.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2010.01.033

• 猪γ-干扰素
• 融合表达
• 单克隆抗体
• 潜在应用 Porcine interferon gamma Fusion expression Monoclonal antibody Potential application

以刀豆素A(ConA)刺激长白猪外周血单个核细胞(PBMC),提取的总RNA为模板,采用一步法RT-PCR扩增出包含猪γ-干扰素(PoIFN-γ)完整基因的片段。将完整的PoIFN-γ基因亚克隆到pET-32a(+)上,构建pET-IFN-γ融合表达载体,转化入Rosetta(DE3)后IPTG诱导表达,得到大小约为36.8kD的目的蛋白。将目的蛋白检测及纯化后免疫后BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,最终筛选出3株能稳定分泌抗猪IFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞。ELISA叠加试验显示,3株单抗针对相同或邻近的PoIFN-γ抗原表位,制备的腹水中单抗间接ELISA效价为1×104。...

• 单位
  农业部; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 中国农业科学院兰州兽医研究所