λRed技术构建肺炎克雷伯氏菌sRNA-sgrS基因缺失突变株

作者：王雪萌; 修宝林; 吕雨泽; 葛菁萍^*

来源：黑龙江大学工程学报, 2020, 11(04): 81-88.

DOI：10.13524/j.2095-008x.2020.04.057

• sRNA-sgrS基因
• λRed同源重组技术
• 基因突变
• 肺炎克雷伯氏菌

肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)以葡萄糖为底物进行发酵生产2,3-丁二醇(2,3-butanetriol,2,3-BD)的过程中,糖磷酸胁迫非编码小RNA(sugar-phosphate stress sRNA, sRNA-sgrS)通过调控菌体内葡萄糖浓度来解除菌体的应激效应。通过λRed同源重组技术,将构建的同源重组片段sgrSA1-EGFP-sgrSA2,经过酶切、纯化后,通过电转化将重组片段转入到含有pKD46质粒的野生型菌株K.pneumoniae HD79及突变型菌株K.pneumoniae HD79-02(△ldh,△ack)的感受态细胞中。经过荧光显微镜观察筛选阳性转化子,经过PCR验证K.pneumoniae HD79及K.pneumoniae HD79-02 sRNA-sgrS基因缺失重组菌株构建成功。利用λRed技术构建肺炎克雷伯氏菌sRNA-sgrS基因缺失突变株,可为后续探究菌体内外葡萄糖浓度对菌株产量2,3-BD的影响奠定了基础。

• 单位
  黑龙江大学; 生命科学学院