多房棘球绦虫钙网蛋白的原核表达及初步鉴定

作者：陈路娟; 咸思奇; 闫艳; 徐志坚; 程喆; 于桂霞; 王彦海^*; 赵利美^*

来源：中国病原生物学杂志, 2022, 17(06): 654-659.

DOI：10.13350/j.cjpb.220607

• 多房棘球绦虫
• 钙网蛋白
• 表达和鉴定
• 抗原性

目的 原核表达多房棘球绦虫钙网蛋白EmCRT,并对其免疫学功能进行初步鉴定。方法 以多房棘球绦虫囊cDNA为模板，PCR扩增目的基因，克隆至pGEX-4T-2载体，构建重组质粒pGEX-4T-2-EmCRT;PCR、酶切鉴定及测序正确后，转化至表达菌BL21(DE3),并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达；运用10%SDS-PAGE电泳以及Western blot分析鉴定表达的重组蛋白rEmCRT。结果 成功构建了重组质粒pGEX-4T-2-EmCRT,转化表达菌BL21后，经IPTG诱导表达及纯化，获得了纯度较高的可溶性重组蛋白rEmCRT,相对分子质量约为72 ku(含表达载体序列);通过Stains all染色，表明rEmCRT具有Ca2+结合能力；免疫学特性鉴定表明rEmCRT具有较好的抗原特异性。结论 成功表达多房棘球绦虫钙网蛋白EmCRT,具有免疫反应性，可为包虫病诊断及其疫苗研发提供理论基础。

• 单位
  内蒙古科技大学包头医学院; 生命科学学院; 厦门大学