miR-34a-5p对胃腺癌细胞凋亡的影响及其作用机制

作者：朱金峰; 曾薇; 王海江

来源：山东医药, 2017, 57(36): 21-24.

• 胃癌
• 微小RNA-34a-5p
• B细胞淋巴瘤2
• 细胞凋亡

目的探讨miR-34a-5p对胃腺癌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法 (1)采用生物信息学技术预测Bcl-2是否为miR-34a-5p的靶基因。(2)体外培养人正常胃黏膜上皮细胞RGM-1、人胃腺癌细胞SGC7901,采用qRT-PCR法检测两种细胞miR-34a-5p、Bcl-2 mRNA表达。(3)将SGC7901细胞随机分为观察组和对照组,观察组转染miR-34a-5p mimic质粒,对照组转染scramble质粒。转染48 h,采用qRT-PCR法、Western blotting法检测Bcl-2 mRNA和蛋白表达。(4)将SGC7901细胞随机分为阴性对照组、Bcl-2 WT组、Bcl-2 MT组,阴性对照组转染miR-34a-5p mimic和pRL-TK,Bcl-2 WT组转染miR-34a-5p mimic、Bcl-2野生型载体和pRL-TK,Bcl-2 MT组转染miR-34a-5p mimic、Bcl-2突变型载体和pRL-TK。转染48 h,采用双荧光素酶报告基因实验检测各组相对荧光素酶活性。(5)将SGC7901细胞随机分为阴性对照组、miR-34a-5p mimic组、pc DNA3.1-Bcl-2组、miR-34a-5p mimic+pc DNA3.1-Bcl-2组,阴性对照组转染scramble+pc DNA3.1-空载体,miR-34a-5p mimic组转染miR-34a-5p mimic,pc DNA3.1-Bcl-2组转染pc DNA3.1-Bcl-2,miR-34a-5p mimic+pc DNA3.1-Bcl-2组转染miR-34a-5p mimic+pc DNA3.1-Bcl-2。转染48 h,采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。结果 (1)Bcl-2为miR-34a-5p的靶基因。(2)SGC7901细胞miR-34a-5p mRNA相对表达量低于RGM-1细胞(P<0.01),Bcl-2 mRNA相对表达量高于RGM-1细胞(P<0.01)。(3)观察组Bcl-2 mRNA和蛋白相对表达量均低于对照组(P均<0.01)。(4)Bcl-2 WT组相对荧光素酶活性低于阴性对照组和Bcl-2 MT组(P均<0.01)。(5)miR-34a-5p mimic组细胞凋亡率高于阴性对照组,pc DNA3.1-Bcl-2组、miR-34a-5p mimic+pc DNA3.1-Bcl-2组低于阴性对照组及miR-34a-5p mimic组,组间比较P均<0.01。结论 miR-34a-5p可通过靶向调控Bcl-2抑制胃腺癌细胞凋亡,进而参与胃腺癌的发生、发展。

• 单位
  新疆医科大学附属肿瘤医院